【摘 要】
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本研究以青藏高原冰川慕士塔格冰芯和奎屯51号冰川冰雪为介质,通过分离培养,分析了慕士塔格冰芯微生物的生理特征和csp基因克隆;通过流式细胞计数和构建环境样品16S rRNA基因的克隆文库,分析了奎屯冰川冰雪微生物数量和细菌菌群结构的变化特征及其与气候环境的关系。1.从慕士塔格冰芯分离菌株中选取了5个代表菌株,分别对这些菌株的生长温度和酸度范围进行了观测,并利用微生物冷诱导蛋白的保守氨基酸序列,设计
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本研究以青藏高原冰川慕士塔格冰芯和奎屯51号冰川冰雪为介质,通过分离培养,分析了慕士塔格冰芯微生物的生理特征和csp基因克隆;通过流式细胞计数和构建环境样品16S rRNA基因的克隆文库,分析了奎屯冰川冰雪微生物数量和细菌菌群结构的变化特征及其与气候环境的关系。1.从慕士塔格冰芯分离菌株中选取了5个代表菌株,分别对这些菌株的生长温度和酸度范围进行了观测,并利用微生物冷诱导蛋白的保守氨基酸序列,设计了一对冷诱导基因csp的特异引物进行PCR扩增。研究结果表明冰川中存在三种类型的微生物:嗜冷菌生长范围为0℃-23℃,最适生长温度为15℃;耐冷菌生长范围为0℃-40℃,最适生长温度为23℃;宽温菌生长范围为0℃-45℃,最适生长温度为30℃。慕士塔格冰芯菌株对酸度变化的反应不同,说明冰川酸度也是影响微生物冰川表面中的数量分布的一个重要因素。从宽温菌葡萄球菌(Staphylococcus equorum) Muzt-D84中成功地克隆出cspA基因片段,大小为171bp。2.对奎屯冰川冰雪表面微生物活性进行了检测,经流式细胞仪分析表明,细胞活/死为1:5-2:3之间,微生物数量出现了波动性的变化,微生物总数为3.70×104 cell.ml-1到69.50×104 cell.ml-1。这说明微生物是在各种特定的历史时期的不同气候环境条件下,呈事件性地沉降到冰川表面,其中的微生物分布是对不同时期气候环境条件的反映,奎屯冰川表面中相当一部分的微生物是具有活性的。3.通过对奎屯冰川冰雪微生物16S rRNA基因文库及核酸序列的分析,从奎屯冰川冰雪表面中克隆到的88个序列结果表明,所有克隆到的16S rRNA基因序列形成了Proteobacteria、Actinobacteria、Cyanobacteria、Cytophaga- Flavobactreium- Bacteroides(CFB)、Deinococcus- Thermus、Chloroflexi、Firmicutes和Eukaryotic chloroplast,以Proteobacteria含量最高,占到总数的57%,其次是CFB组,占总数的23.7%,Cyanobacteria占总数的7%,Actinobacteria占总数的2.48%,其他类占总数的3.55%。这些克隆序列分属于Deinococcus、Variovorax、Microcoleus、Polyangium、Phormidium、Bradyrhizobium、Thiobacillus、Polaromonas、Sphingomonas、Hymenobacter、Panaciterramonas、Arthrobacter、Leifsonia、Janthinobacterium、Halobacillus、Hymenobacter、Pedobacter、Leptolyngbya、Limnothrix、、Flectobacillus、Flavobacterium、Microcoleus属以及其它种类,共31个属,9个为未鉴定的属,其中Panaciterramonasax和Variovorax属是整个菌群中的优势属。微生物菌群结构随海拔高度的变化具有明显的的分布特征,海拔越高,微生物群落种类越少,不同的冰或雪环境中分布着特定类群的微生物。
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