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本试验通过两步法、经典法、玻璃冷冻法溶液VS1和玻璃冷冻法溶液DAP213四种处理冷冻保存了50只家猫的卵巢皮质薄片。通过对新鲜和冷冻复苏后的卵巢组织进行组织学观察、电镜观察,分离冷冻后卵巢组织的卵泡进行体外培养并检测培养液中雌激素水平,从而检验猫科动物卵巢组织在超低温冷冻后是否保存活性,进而选择一种较为适合猫科动物卵巢组织保存的冷冻方法。 组织学切片显示,四种冷冻处理以玻璃化冷冻法溶液VS1处理组对卵巢组织、卵泡正常形态造成的损伤较小。电镜观察可见在冷冻保存后卵母细胞的超微结构如:透明带、微绒毛、微管和皮质颗粒等受到了不同程度的破坏。 使用酶法结合机械法分离卵泡,平均每只家猫可获得卵泡33.78个。用台盼兰死活染色计算卵泡存活率,两步法、经典法、玻璃冷冻法溶液VS1和玻璃冷冻法溶液DAP213四种处理得到的卵泡存活率分别为34.5%,40.0%,53.4%和47.2%。 经过四种处理冷冻保存的卵巢组织,复苏后分离得到的直径为100～210μm的卵泡333个用于体外培养,四种处理后分离的卵泡均保持了继续生长的能力,其中有一个卵母细胞经体外培养发育并排出第一极体。经两步法、经典法、玻璃冷冻法溶液VS1和玻璃冷冻法溶液DAP213冷冻保存后分离得到的卵泡培养4d时卵泡退化率为86.88%、65.63%、68.45%和56.86%,四种方法间差异不显著;存活卵泡直径与其开始培养时相比增长幅度分别为6.75μm、7.33μm、8.45μm和6.68μm,四种方法间差异不显著。本试验用酶联法测定卵泡体外培养液中17β-E2水平,所有样本均有阳性反应,其中测得三个样本中17β-E2含量分别为5.882 pg/50μl、2.951 pg/50μl和1.299pg/50μl。表明四种方法冷冻后的颗粒细胞均具有活性,保持了分泌雌激素的功能。 通过对冷冻后卵巢组织活性的检验,四种方法冷冻保存后的卵巢组织均具有活性。其中玻璃冷冻法溶液VS1组冷冻效果较好。