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研究背景法尼醇X受体(fretinoid X receptor,FXR)又名胆汁酸受体,属于核受体超家族的一员(nuclear receptor subfamily 1 group H member 4,NR1H4),是配体激活的转录因子。FXR可通过促进细胞凋亡、抑制细胞增殖而发挥潜在的抗肿瘤作用,目前已经对食管癌、乳腺癌、肝细胞癌、胰腺癌和结肠癌进行了一些小样本的研究,大多不涉及FXR表达与临床病理参数和患者预后之间的潜在性联系。FXR在胰腺癌中的研究存在致癌与抑癌的勃论结果,根据之前的研究数据表明,FXR的作用机制是具有一定组织特异性的。对于胰腺癌组织这种特殊性表现的更为明显,不同学者的研究数据呈现不同的结果。显然,大相径庭的研究结果促使我们重新探索FXR在胰腺癌这种致死性疾病中的作用。目的应用新型的原位杂交技术RNAscope方法和免疫组织化学技术超敏多聚物二步法来检测176例病理诊断为胰腺导管腺癌的患者组织中核因子受体1H4(nuclear receptor 1H4,NR1H4)-信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,m RNA)和蛋白的表达状况,进一步分析其与临床病理资料、预后的相关性和临床意义,同时探索应用RNAscope技术是否能加强免疫组化结果的可靠性。方法本次课题采用RNAscope原位杂交和免疫组化技术检测包含有176例人胰腺癌组织的芯片中NR1H4(FXR)-m RNA和蛋白的表达程度,采用ACD公司RNAscope技术和NR1H4探针;本次免疫组化采用的是多聚物二步法,分别购置4种不同公司、不同克隆号的法尼醇受体(FXR)一抗。实验前采用小型人胰腺癌组织芯片(20例癌组织,4例人正常肝组织)进行NR1H4探针和4种法尼醇受体(FXR)一抗实验条件的优化,并执行严格的质控对照。结果在176例人胰腺导管腺癌组织中NR1H4(FXR)m RNA与其蛋白的阳性表达率分别为68.75%(121/176)和77.27%(136/176);其中四种一抗的阳性率分别为(ab187735)为68.75%(121/176)、(ab235094)为75.57%(133/176)、(25055-1-AP)为73.30%(129/176)和(SC-25309)为71.02%(125/176)。m RNA和蛋白的表达间具有相关性(r=0.307,P<0.001)。NR1H4(FXR)m RNA和蛋白表达分别与患者的临床分期(Χ~2=5.391,P<0.05和Χ~2=4.108,P<0.05)和分化程度(Χ~2=6.56,P<0.01和Χ~2=4.969,P<0.05)呈显著相关;但其中只有蛋白表达与肿瘤大小有一定相关性(Χ~2=4.957,P<0.05);而与性别、年龄、神经浸润、淋巴结转移之间均无明显的关联性(P>0.05)多因素分析结果显示法尼醇受体免疫组化总表达与胰腺导管腺癌的总生存期(HR=0.338,95%CI=0.244?0.468,p<0.001)和无进展生存期(HR=0.309,95%CI=0.195-0.490,p<0.001)均具有显著的相关性。RNAscope原位杂交检测NR1H4(FXR)m RNA表达与胰腺导管腺癌的总生存期(HR=0.550,95%CI=0.390-0.775,p<0.001)和无进展生存期(HR=0.5223,95%CI:0.3281-0.8315,p=0.01)均具有显著的相关性。结论1.研究结果表明NR1H4(FXR)在胰腺导管腺癌中的表达与患者的临床分期和分化程度有显著相关性。高表达是影响胰腺癌患者无瘤生存期和总生存期的独立危险因素。2.本次实验应用了RNAsope原位杂交技术来印证NR1H4(FXR)抗体所得的免疫组化结果,使研究结果更加可信及准确,提高了数据的证据等级。证实此项技术今后可广泛运用于临床病理相关基因靶点的检测和实验研究。