猪瘟病毒E2基因主要抗原编码区的序列分析及猪瘟免疫防制研究

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猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的一种病毒性传染病。猪瘟兔化弱毒疫苗有效地控制了猪瘟在我国的急性暴发和大流行。80年代以来,我国出现了温和型的非典型猪瘟,这一情况使猪瘟的防制更为复杂化。本论文主要包括猪瘟野毒E2基因上主要抗原编码区的序列分析和猪瘟免疫两方面的研究。通过对猪瘟病毒目的片段的克隆测序,分析了E2基因主要抗原区B、C区域的序列和抗原性;通过检测仔猪猪瘟母源抗体水平,了解母源抗体在仔猪体内的消长规律;通过对两组注射不同疫苗母猪的抗体检测,探讨猪瘟的犊牛睾丸细胞苗和兔体反应脾淋苗的免疫效果。 E2基因主要抗原编码区的序列分析是以广东东莞某猪场的一猪瘟阳性病料为研究对象。根据基因库中已发表HCV全基因序列,应用DNAstar、PrimerPremier等软件设计一对引物;抽提病料(组织或血液)基因组RNA;用下游引物(P2)对目的基因进行反转录,利用上游(P1)和下游引物(P2)对所得到的cDNA进行PCR扩增;检测并记录阳性结果(272bp);将该阳性片段克隆到pMD18-TVector中并测序。通过酶切和测序鉴定结果表明,所得到序列与目的片段一致;与兔化弱毒(疫苗毒)和石门毒等毒株进行比对分析,发现,该序列与广西GXWZ02毒株的同源性为95.2%,与疫苗株的同源性为84.4%,但抗原性和疏水性分析表明所测野毒与疫苗毒的抗原性和疏水性十分相似,表明野毒的变异还不会影响该野毒株的抗原性,疫苗毒免疫的效果不会因此降低。多次的样品检测还表明,该方法可以在实验室内有效检测猪瘟病毒。 猪瘟抗体的检测采用IDEXX公司生产的试剂盒,试验分别在东莞和惠州两个猪场完成。 1仔猪猪瘟母源抗体消长规律的研究 随机选取怀孕母猪10头,产前20天用2头份脾淋苗免疫,分娩后从每窝中抽取3头,共计30头仔猪,分别在3、10、20和30日龄采血测定猪瘟抗体水平。结果表明,仔猪猪瘟母源抗体在仔猪出生后的3~10天里都可以维持在较高水平,20日龄后迅速下降,34日龄断奶前已降到80%的抗体阳性率。另外,对仔猪的调查结果显示,怀孕母猪前20天注射2头份兔体反应脾淋苗不会影响仔猪成活率。 2两种疫苗免疫效果研究 随机选取母猪80头,平均分成两组,一组注射6头份/头细胞苗,另一组注射2头份/头兔体反应脾淋苗,免疫后21天采血测定猪瘟抗体水平。结果表明,2头份脾淋苗比细胞苗能更好地诱导抗体的迅速升高。
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