【摘 要】
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目的1.通过随机对照试验评价五加减正气散治疗寒湿型轮状病毒性肠炎的临床疗效。2.以PI3K/AKT/mTOR自噬通路为立足点,研究五加减正气散治疗轮状病毒性肠炎的作用机制。方法1.以116例轮状病毒性肠炎（Rotavirus enteritis,RVE）患儿为研究对象,试验组59例,对照组57例,采用随机、对照的临床试验方法来进行临床疗效观察,两组患儿均给予口服补液盐（Oral Rehydrati
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目的1.通过随机对照试验评价五加减正气散治疗寒湿型轮状病毒性肠炎的临床疗效。2.以PI3K/AKT/mTOR自噬通路为立足点,研究五加减正气散治疗轮状病毒性肠炎的作用机制。方法1.以116例轮状病毒性肠炎（Rotavirus enteritis,RVE）患儿为研究对象,试验组59例,对照组57例,采用随机、对照的临床试验方法来进行临床疗效观察,两组患儿均给予口服补液盐（Oral Rehydration Salts,ORS）进行基础治疗。对照组患儿给予蒙脱石散口服,试验组给予五加减正气散口服。通过观察两组患者的单项症状评分及总评分、证候疗效、腹泻停止时间、大便RV转阴率、血清学指标、综合疗效,客观地评价五加减正气散治疗RVE的临床疗效和安全性。2.以人克隆结肠腺癌细胞（Caco-2）为载体,以轮状病毒P株（G3P[8]）为研究对象,首先对轮状病毒感染是否能引起宿主细胞的自噬反应开展研究,利用自噬流试剂盒和透射电镜观察病毒感染对细胞自噬的影响,并利用q RT-PCR法检测轮状病毒基因组VP7、NSP4的表达情况以研究细胞自噬与轮状病毒复制之间的联系。而后40只4周龄的雄性Wistar大鼠随机分为五加减正气散高剂量组、五加减正气散中剂量组、五加减正气散低剂量组、空白对照组,每组10只,用药3天后,制备含药血清。自噬流试剂盒和透射电镜观察含药血清对染毒细胞自噬的影响,通过Western Blot法分别检测自噬相关蛋白Beclin 1、P62的表达;PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达。q RT-PCR法检测ATG5、ATG12m RNA以及PI3K、AKT、mTOR m RNA的表达。结果1.五加减正气散治疗RVE具有良好的临床疗效。治疗前,五加减正气散与蒙脱石散对照组的症状积分及理化指标差异无统计学意义（P＞0.05）;经过治疗后,五加减正气散水煎液口服的试验组与蒙脱石散口服的对照组都能够有效缓解患儿腹泻、腹痛肠鸣、恶心呕吐等主要、次要症状积分,但五加减正气散水煎液口服的缓解效果显著优于蒙脱石散（P＜0.01）,且中医症状总积分显著低于对照组（P＜0.01）;在止泻时间、轮状病毒转阴率、炎性指标方面,五加减正气散水煎液口服较蒙脱石散疗效显著（P＜0.01）;两组综合疗效对比,五加减正气散水煎液口服的试验组显著优于蒙脱石散口服的对照组（P＜0.01）。2.通过自噬流实验和透射电镜观察到在轮状病毒感染早期阶段染毒细胞的自噬水平不断增强,到4h时自噬水平最强。q RT-PCR法对轮状病毒基因组NSP3和VP7的复制数进行了检测,结果发现引入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制自噬后病毒NSP3和VP7的复制数显著降低（P＜0.01）。加入含药血清后,五加减正气散高、中、低剂量组的自噬水平显著低于RV组,其中以五加减正气散高剂量组最显著,自噬相关蛋白Beclin 1的水平显著下降,P62的水平显著升高,同时ATG5、ATG12 m RNA的表达亦显著降低（P＜0.01）,PI3K/AKT/mTOR信号通路相关PI3K、p-AKT、p-mTOR的蛋白和PI3K、AKT、mTOR m RNA水平显著降低（P＜0.01）。结论1.五加减正气散水煎液口服能够显著缓解RVE患儿腹泻、腹痛、发热、恶心呕吐等的临床症状,缩短止泻时间、提高病毒转阴率、减轻炎症反应,且无不良反应。2.五加减正气散对轮状病毒感染的作用机制可能与其能够干预PI3K/AKT/mTOR信号通路从而调控Caco-2细胞的自噬反应有关。
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