食蟹猴滋养层干细胞系的建立

来源 :昆明理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaoluc
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胎盘在妊娠期连接母体和胎儿界面,具有许多重要的功能,如营养供应、气体和废物交换等。滋养层干细胞(Trophoblast stem cells,TSCs)是胎盘分化细胞的前体细胞,但是调节滋养层干细胞发育的分子机制目前仍然知之甚少。所以,建立人和非人灵长类动物滋养层干细胞的体外培养模型对于研究早期胎盘发育和滋养层分化过程具有重要意义。本论文从食蟹猴体外延时培养的胚胎中建立了3个食蟹猴滋养层干细胞系,分别命名为食蟹猴E15\E20\E19-TS细胞。使用免疫荧光染色、PCR以及单细胞测序等方法鉴定,食蟹猴TS细胞表达滋养层的相关标志物:GATA3、TFAP2C、CK7(KRT7)和TEAD4。该食蟹猴TS细胞可以向绒毛膜外滋养层细胞(Extravillous trophoblasts,EVT)和合胞体细胞(Syncytiotrophoblasts,ST)分化。向EVT分化的食蟹猴TS细胞表达EVT侵袭性相关标志物MMP2和N-cadherin,食蟹猴TS细胞向ST分化使用了ST-2D和ST-3D两种不同的培养方法,使用GCM1和E-cadherin免疫荧光染色鉴定,结果显示ST-2D分化细胞具有部分多核的现象,并且向ST的诱导分化会使细胞的细胞膜产生改变,促进部分细胞融合。分化细胞高表达滋养层分化细胞的相关基因:SDC1、ITGA5、MMP2、GCM1和CBG,并且EVT和ST-3D细胞具有分泌孕酮的能力。在异种嵌合的实验中,食蟹猴TS细胞不影响整个嵌合体胚胎的发育,并且仅嵌合到E4.5和E6.4的小鼠嵌合体胚胎的滋养外胚层发育。
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