【摘 要】
:
[目的]课题组在前期研究发现肺癌组织中存在微生物,探讨大肠杆菌(E.coli)对肺上皮细胞MUC16表达影响及调控机制。[方法]1.建立细胞菌株共培养体系:将肺腺癌细胞NCI-H1734、肺鳞癌细胞SK-MES-1和正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B扩增传代后分别与大肠杆菌标准菌株 ATCC25922、敲除 dgcQ 基因的 ATCC25922 菌株(ATCC25922ΔdgcQ)、敲除 dgcE
【基金项目】
:
国家自然科学基金(82060426):LINC00842调控MUC16与TERT表达在云南宣威家族肺癌遗传易感中的作用及机制研究; 国家自然科学基金(81960335):大肠杆菌运动与触觉调控在生物材料植入感染中的作用及机制研究; 云南省卫生科技计划(2018NS0081):不同粒径二氧化硅与3,4-苯并芘在云南宣威女性肺
论文部分内容阅读
[目的]课题组在前期研究发现肺癌组织中存在微生物,探讨大肠杆菌(E.coli)对肺上皮细胞MUC16表达影响及调控机制。[方法]1.建立细胞菌株共培养体系:将肺腺癌细胞NCI-H1734、肺鳞癌细胞SK-MES-1和正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B扩增传代后分别与大肠杆菌标准菌株 ATCC25922、敲除 dgcQ 基因的 ATCC25922 菌株(ATCC25922ΔdgcQ)、敲除 dgcE基因的ATCC25922菌株(ATCC25922ΔdgcE)共培养。在共培养4h、8h和15h时,观察细胞菌株共培养条件下细胞形态和群体密度变化。2.细胞与菌株共培养4h、8h和15h时,取各组细胞菌株共培养体系,用中性甲醛固定,再用伊红和Hoechst 33258染液染色后拍摄荧光照片,观察细胞胞质蛋白和核内DNA状态。3.细胞与菌株共培养4h、8h和15h时,用qRT-PCR检测细胞MUC16基因、管家基因(GAPD、ACTB、UBC、TBP、SDHA、HPRT1、YWHAZ)及相关基因(LINC00842、MNT、MAX、MAZ、DACH1、TERT)表达情况。4.聚类分析与MUC16基因变化规律相似的调控基因或相关基因。[结果]1.各菌株单独培养时状态差异不同菌株生长情况差异:ATCC25922生长最快,8h、15h菌株密度最高;ATCC25922ΔdgcQ生长最慢,8h、15h菌株密度最低;三者中ATCC25922ΔdgcE生长速度居中,8h和15h菌株密度均居中。2.细胞菌株共培养条件下细胞形态和群体密度变化1)肺支气管上皮细胞BEAS-2B和大肠杆菌共培养加入菌株的BEAS-2B细胞整体死亡率(10%~20%)不高,存活的细胞圆缩变小,有相互粘连现象,整体表现出优于肺癌细胞(NCI-H1734、SK-MES-1)的耐受力。菌株杀伤力比较:ATCC25922菌株对BEAS-2B细胞的杀伤力最强、ATCC25922ΔdgcQ菌株对细胞的杀伤力最低、ATCC25922ΔdgcE菌株对细胞的杀伤力居中。2)肺腺癌细胞NCI-H1734与大肠杆菌共培养加入菌株的NCI-H1734细胞整体耐受力相比其他两种细胞居中:肺腺癌细胞NCI-H1734死亡率(50%~85%)高于正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B(10%~20%),但低于肺鳞癌细胞SK-MES-1(70%~90%)。菌株杀伤力比较:ATCC25922菌株对NCI-H1734细胞的杀伤力居中、ATCC25922ΔdgcQ菌株对NCI-H1734细胞的杀伤力最高、ATCC25922ΔdgcE菌株对NCI-H1734细胞的杀伤力最低。3)肺鳞癌细胞SK-MES-1与大肠杆菌共培养加入菌株的SK-MES-1细胞死亡率(70%~90%)在3株细胞中最高,15h时细菌增殖最为明显,整体与其他两种细胞(BEAS-2B、NCI-H1734)相比耐受力最低。菌株杀伤力比较:ATCC25922对SK-MES-1细胞的杀伤力最强、ATCC25922ΔdgcQ菌株对细胞的杀伤力居中、ATCC25922ΔdgcE菌株对细胞的杀伤力最低。3.细胞菌株共培养条件下细胞关键基因表达的变化1)肺上皮细胞和大肠杆菌共培养MUC16基因变化加入大肠杆菌后BEAS-2B细胞内MUC16基因在各时间点均显著升高,较单独培养时高3到5倍;NCI-H1734细胞MUC16基因在各时间点均显著升高,较单独培养时高4到7倍;SK-MES-1细胞MUC16基因在4h稍低于单独培养时;8h和15h时显著升高,较单独培养时高4到5倍。2)细胞MUC16调控基因及其相关基因在共培养条件下的表达变化MUC16在共培养体系呈现和TERT的趋势相似。在肺上皮细胞BEAS-2B组的共培养体系中:MUC16和TERT的共同上游转录因子,4h以MAZ、MAX为主,8h以MAX、MNT、DACH1为主,15h则以MNT为主。在不同分组条件下LINC00842和DACH1、MNT、MAZ的变化规律接近肺腺癌细胞NCI-H1734组的共培养体系中:MUC16和TERT的共同上游转录因子,4h以MAZ、MAX为主,8h以MAZ、DACH1为主,15h则以MAZ为主。在不同分组条件下LINC00842和MAZ、DACH1的变化规律接近。[结论]1.大肠杆菌dgcQ与dgcE基因可影响菌株的生长速度和运动能力。2.大肠杆菌(标准株 ATCC25922、ATCC25922ΔdgcQ、ATCC25922ΔdgcE)与肺上皮细胞(BEAS-2B、NCI-H1734、SK-MES-1)共培养过程中,正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B对大肠杆菌耐受能力最强,肺腺癌细胞NCI-H1734次之,肺鳞癌细胞SK-MES-1最差。3.大肠杆菌与肺上皮细胞(BEAS-2B、NCI-H1734、SK-MES-1)共培养过程中,MUC16表达上调趋势明显,以肺腺癌细胞NCI-H1734中上调最为显著。4.肺腺癌细胞NCI-H1734组的共培养体系中,MUC16和TERT变化规律相似,可能通过调节MAZ、DACH1进而调控MUC16。
其他文献
[目 的]通过基因测序、免疫组化方法检测不同病理级别脑胶质瘤中RTEL1突变及表达情况,筛选过表达RTEL1的目的细胞,敲低其表达后检测肿瘤细胞增殖、细胞周期及端粒酶的活性,研究RTEL1在胶质瘤中的作用。[方 法]1.用TCGA中的基因表达谱数据动态分析数据库(Gene Expression Profilling Interactive Analysis,GEPIA)分析RTEL1对胶质瘤总体生
[目的]本文通过设计体内外实验,旨在阐述miR-125b-5p在肺腺癌增殖及转移中的作用。[方法]1.qRT-PCR检测miR-125b-5p在肺腺癌细胞系(XWLC-05、SPC-A1、A549、H1299、95-D),与正常人支气管上皮细胞HBE中的表达水平,选取miR-125b-5p表达水平最高的人肺腺癌细胞系用于构建稳转细胞系。2.构建miR-125b-5p mimic、miR-125b-
[背景和目的]肺癌是威胁人类健康一大杀手,居高不下的发病率和死亡率致使其成为人类攻克肺癌在内的诸多恶性肿瘤的焦点和难点。临床上根据病理类型和生物学行为的差异可将肺癌划分为非小细胞肺癌(NSCLC,non-small cell lung cancer)和小细胞肺癌。其中非小细胞肺癌在所有肺癌类型中占据主要部分,而在非小细胞肺癌中,发病率呈逐年升高的肺腺癌成为其主要病理类型,总生存率低和预后差的特点导
[目 的]地舒单抗是治疗骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)唯一的靶向药物,其详细作用机制并未完全明确。前期研究发现p62蛋白在GCTB组织中高表达,下调p62蛋白表达能够抑制GCTB单核基质细胞增殖及侵袭,可能与地舒单抗疗效相关。本研究通过检测地舒单抗治疗GCTB前后p62蛋白表达变化,分析p62蛋白与地舒单抗疗效的相关性,初步探讨p62蛋白在地舒单抗治疗GC
[目 的]对miR-508-3p在肺腺癌中的临床意义及生物信息学进行分析,研究过表达miR-508-3p对肺腺癌细胞中增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡等生物学行为的影响;预测miR-508-3p潜在的作用靶点及相关信号通路,并对其潜在作用靶点基因进行初步验证,为肺癌的诊断及治疗提供一定的理论依据。[方法]1.下载TCGA数据库中肺腺癌患者的一般资料及临床病理信息,包括:性别、年龄、吸烟史、病理类型
[目 的]本课题旨在探讨不同病理类型肺癌患者全身骨显像复查最佳时间段,以指导患者合理的复查,既能达到有效复查效果又能减轻患者不必要的医疗负担及辐射。[方法]回顾性收集2018年至2021年在云南省肿瘤医院核医学科及昆明市延安医院核医学科进行全身骨显像检查的肺癌患者,筛选经过病理学诊断及其他检查方式确诊为肺癌的患者,追踪患者后期的随访记录,分别统计不同病理类型肺癌患者的随访时间,并分析其骨显像结果。
[目 的]肺癌是世界上癌症发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。肿瘤免疫微环境是肿瘤发展的一个重要因素。研究肺癌的肿瘤微环境可以进一步了解肿瘤的发生发展,为进一步寻求肺癌的治疗提供帮助。[方 法]收集昆明医科大学第一附属医院老年胸外科2020-9至2020-11月份住院手术NSCLC患者肿瘤组织,癌旁组织和正常组织。总计收集39例,最后纳入35例患者,根据患者TNM分期,其中T1a期患者22例,T1b和T
[目的]探讨CT三维重建技术在解剖性肺段切除术中治疗肺结节的临床应用价值,包括对围术期各指标的影响和术前手术指导作用。[方法]回顾性分析昆明医科大学第一附属医院胸外科2019年9月至2021年1月行胸腔镜解剖性肺段切除术治疗肺结节40例患者的临床资料。其中,男9例(22.5%),女31例(77.5%),年龄36-70岁,平均51.8±8.1岁。肺部小结节直径大小为0.5-1.5cm,平均0.85c
[目 的]本研究通过回顾性分析60例结直肠癌患者病历资料并检测结直肠癌和正常肠组织中IL-17A和CD206的表达,探讨肿瘤微环境中Th17和M2细胞在结直肠癌组织中的表达并研究其临床病理特征的相关性。[方法]选自2020年1月1日至2020年12月31日,于昆明医科大学第一附属医院胃肠外科收治住院并首次行结直肠癌根治术,及术后临床病理诊断为结直肠腺癌患者的临床病历资料入组,最终纳入符合要求的60
[目的]:对云南肺结节患者的临床相关资料、影像学资料、肿瘤标志物等因素进行回顾性分析,对各因素进行单因素及多因素分析,得出肺结节恶性概率预测的独立危险因素,最终建立肺结节恶性概率的预测模型。[方法]:本研究选取了 2017年5月至2020年12月期间,因肺结节在昆明医科大学第一附属医院行手术治疗并且最终有病理检查的云南籍病人共1139例。收集患者的临床特征、影像学特征、肿瘤标志物结果。将所有患者按