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背景:宫颈癌（cervical cancer）是一种常见的妇科恶性肿瘤,在世界范围内常年位居女性恶性肿瘤发病率和死亡率的第四,严重威胁着女性的生命健康。宫颈癌是一种多因素诱导的疾病,其中高危型人乳头瘤病毒（High risk-Human papillomavirus,HR-HPV）的持续感染发挥着重要作用,除此之外,个体因素（生活习惯以及宿主的遗传因素等）在宫颈癌的发生中也发挥着重要作用。研究发现,在宫颈癌组织中大量微小RNA（microRNA,miRNA）的表达出现失调。MiR-126（miR-126-3p和miR-126-5p）在包括宫颈癌在内的多种肿瘤中低表达,可能参与宫颈癌的发生过程。研究发现,位于miRNA基因中的单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphisms,SNPs）可能会通过影响成熟miRNA的表达,从而与肿瘤发生风险相关。我们课题组前期的针对miRNA基因中SNPs位点与宫颈癌的相关性研究结果显示,miR-126基因中的SNP位点rs4636297与云南汉族人群宫颈癌的发生风险相关。基于以上资料本研究拟对miR-126在宫颈癌中发挥的作用和相关机制,以及其基因中的SNP位点的功能展开研究。目的:目前的研究均只针对miR-126-5p或miR-126-3p与宫颈癌的关系进行研究,本研究将通过miR-126真核表达载体在宫颈癌细胞中同时过表达miR-126-3p和miR-126-5p,系统性地对miR-126在宫颈癌中发挥的作用及其机制进行研究。并进一步在前期遗传学研究结果的基础上,分析miR-126基因变异对宫颈癌细胞中成熟miR-126表达的影响,揭示miR-126基因中的SNP位点rs4636297与宫颈癌发生风险相关的可能机制。方法:1.通过qPCR的方法分析宫颈癌组织中miR-126的表达情况;2.miR-126在宫颈癌中发挥的作用:（1）构建miR-126瞬时表达载体pcDNA3.1-miR-126和稳定表达载体pLVshRNA-eGFP-miR-126,同时构建miRNA阴性对照表达载体;（2）在宫颈癌Hela细胞中通过过表达miR-126,研究miR-126对Hela细胞增殖、迁移、侵袭等特性的影响。3.miR-126在宫颈癌Hela细胞中发挥作用的机制:（1）通过数据库预测miR-126-3p和miR-126-5p在肿瘤相关信号通路中可能的靶基因;（2）通过qPCR及Western blot分析在Hela细胞中过表达miR-126-3p或miR-126-5p对其肿瘤信号通路中靶基因的表达水平的影响;（3）通过双荧光素酶报告基因检测系统对miR-126-3p或miR-126-5p与靶基因的相互作用关系进行验证。4.分析rs4636297与宫颈癌发生风险相关的机制:（1）构建携带rs4636297不同等位基因（A或G）的瞬时和稳定表达载体,同时构建miRNA阴性对照表达载体;（2）分析瞬时表达和稳定表达系统中不同等位基因表达载体与成熟miR-126的表达的关系,初步分析rs4636297与宫颈癌易感性相关的机制。结果:1.miR-126（miR-126-3p 和 miR-126-5p）,研究 miR-126 在宫颈癌中发挥抑癌基因的作用:（1）成熟miR-126（miR-126-3p和miR-126-5p）在宫颈癌组织的相对表达水平低于癌旁组织以及正常组织,差异具有统计学意义（P<0.05）;（2）在宫颈癌Hela细胞中过表达miR-126可以抑制Hela细胞的增殖、迁移和侵袭等生物学特性。2.在宫颈癌Hela细胞中miR-126通过靶向PI3K信号通路中的基因发挥抑癌基因的作用:（1）通过miRNA-mRNA相互作用数据库分别对miR-126-3p和miR-126-5p在肿瘤相关信号通路的靶基因预测的结果显示,miR-126-3p和miR-126-5p均可靶向PI3K信号通路上的分子;（2）向Hela细胞转染miR-126-5p和miR-126-3p的模拟物后,miR-126-3p靶基因CRK和PIK3R2在mRNA水平和蛋白水平均出现下调,而miR-126-5p靶基因PIK3CA的表达同样被抑制。（3）双荧光素酶报告基因检测系统研究结果显示,miR-126-3p在Hela细胞中可以靶向PIK3R2 和 CRK,而 miR-126-5p 在 Hela 细胞中可以靶向 PIK3CA。3.rs4636297 不同等位基因与成熟miR-126的表达水平无相关性:（1）在携带miR-126基因中的SNP位点rs4636297的不同等位基因的瞬时表达和稳定过表达miR-126的Hela细胞中,成熟miR-126相对表达水平的差异无统计学意义（P>0.05）;（2）该结果表明,rs4636297并不是通过影响成熟miR-126的表达而与宫颈癌的易感性相关的,该位点可能通过其他机制与宫颈癌的易感性相关。结论:综合以上研究结果,在宫颈癌Hela细胞中,miR-126可以通过靶向PI3K信号通路的CRK、PIK3R2以及PIK3CA而发挥抑癌基因的作用。而且miR-126基因中的SNP位点rs4636297并不是通过影响成熟miR-126的表达而与宫颈癌的发生风险相关。