应用噬菌体7肽库筛选血型抗原A模拟多肽的研究

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目的:  从噬菌体随机7肽库筛选血型A抗原的模拟表位,并对其进行鉴定。  方法:  1.将抗A抗体蛋白作为靶分子,运用噬菌体展示技术,对噬菌体随机7肽库进行三轮筛选,每次筛选之后的洗脱产物作为后一轮筛选的投入。  2.用第三轮筛选得到的洗脱物来滴定平板,然后随机从长出的平板菌落中挑选单克隆噬菌体进行扩增。采用ELISA方法对单克隆噬菌体与抗A抗体蛋白的结合亲合力进行初步鉴定,并将ELISA阳性的克隆扩增,提取DNA测序。  3.在测序结果中选取相应噬菌体克隆,用梯度ELISA以及红细胞玻片凝集试验进一步测定噬菌体克隆与抗A抗体蛋白的结合力。  结果:  1.通过三轮筛选,产出投入比值总体呈上升趋势,达200倍的总富集率。ELISA方法初步鉴定68个随机噬菌体单克隆里面存在十五个阳性克隆,阳性率22%。  2.提取阳性噬菌体单克隆的DNA并测序,其中有两个单克隆(clone31和clone61)为同一序列,其它克隆的序列虽没有完全相同的序列,但多数存在部分相同的序列。  3.梯度ELISA中将clone61的序列合成多肽稀释成不同的稀释倍数,且随着多肽的稀释倍数的增加,吸光度逐渐降低,对照组则不呈相关性。  4.红细胞凝集抑制实验中,clone61的合成多肽对红细胞凝集的抑制效果,相对于未使用多肽的阴性对照组,更加显著。  结论:  经过三轮筛选的多肽序列能够模拟血型A糖类抗原与抗A抗体的亲合功能。
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