p21~(WAF1/CIP1)-p27~(KIP1)双基因转染胃癌细胞对细胞周期的影响

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【摘要】目的探讨p21WAF1/CIP1-p27KIP1(p21-p27)双基因转染SGC-7901胃癌细胞对细胞周期的影响,寻找治疗胃癌的新途径。方法将p21-p27两个抑癌基因构建于同一真核表达载体pIRES-p21-p27,然后通过脂质体介导法将载体导入处于对数生长期的胃癌细胞SGC-7901中。分别收集并用4℃预冷乙醇固定12h、24h、48h、72h和5d后的细胞,用流式细胞仪检测细胞周期的改变以及细胞周期素Cyclin D1和Cyclin E的时相性表达量的变化。实验共分五组,分别为:SGC-7901胃癌细胞组、pIRES-SGC-7901胃癌细胞组(空载体转染组)、pIRES-p21-p27-SGC-7901胃癌细胞组(双基因转染组)、DADS-SGC-7901胃癌细胞组(DADS组)和pIRES-p21-p27+DADS组(双基因转染+DADS组)。SGC-7901胃癌细胞组作为阴性对照组,不做任何干预;空载体转染组是将pIRES空载体(OD260:0.375μg/μ1,OD260/OD280:1.56)转染SGC-7901胃癌细胞;双基因转染组的操作方法与空载体pIRES转染胃癌细胞方法相同,不同之处是前者是转染pIRES空载体,而后者是pIRES-p21-p27双基因真核表达载体;DADS组采用近来研究较多的肿瘤细胞诱导分化剂二烯丙基二硫(DADS)作用胃癌细胞;双基因转染+DADS组是在转染pIRES-p21-p27双基因真核表达载体的基础上,用DADS进一步诱导分化。共三个观察指标,分别是:(1)细胞周期分布情况;(2)细胞周期素Cyclin E的时相性表达;(3)细胞周期素Cyclin D1的时相性表达。所有数据采用SPSS11.5 for Windows统计软件包进行统计学分析。结果双基因转染组、DADS组和双基因转染+DADS组三组都出现了细胞周期阻滞现象,不过阻滞所发生的时相不尽相同:双基因转染组的细胞周期阻滞发生在G1期;DADS组的细胞周期阻滞发生在G2/M期;双基因转染+DADS组则在G1期和G2/M期都出现了明显的阻滞。由于后者G1期和G2/M期都发生了阻滞,导致S期细胞明显减少,与双基因转染组和DADS组相比对细胞增殖的抑制作用更强,差异明显,有高度统计学意义。双基因转染组、DADS组和双基因转染+DADS组均出现了Cyclin D1和Cyclin E表达下降,三组间差异虽无明显差别,但与空载体转染组或SGC-7901组相比差异却有高度统计学意义。结论p21WAF1-p27KIP1双基因转染SGC-7901胃癌细胞,可使细胞周期阻滞在G1期,胃癌细胞的失控性增殖受到明显的抑制;二烯丙基二硫(DADS)对胃癌细胞SGC-7901的增殖亦有显著抑制作用但细胞周期是被阻滞在G2/M期而非G1期;p21-p27双基因转染的基础上用二烯丙基二硫(DADS)进一步诱导分化,对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用更加显著,细胞周期在G1期和G2/M期都有明显阻滞,S期细胞减少。p21-p27双基因转染和二烯丙基二硫(DADS)联合应用,有望成为治疗胃癌的新途径,有着广阔的应用前景。
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