背景:敌草快是一种联吡啶类除草剂,除草具有广谱性且快速,自1958年上市以来为世界各国广泛采用。随着敌草快在农林业的广泛使用,由于保存、使用不当甚至口服除草剂所导致的健康问题也随之出现。近两年来,我科收治的敌草快中毒患者数量呈明显上升趋势。目前关于敌草快的研究多为农业生态方面的研究,以及临床病例个案报道,对于敌草快中毒治疗方面的研究很少。血液净化是将患者的血液排出体外,利用净化装置除去一些致病物质,净化血液,达到治疗疾病的目的。在各种净化方法中,血液灌流(hemoperfusion,HP)是最常用的,广泛应用于各种急性药物中毒或有毒物质中毒的治疗,近两年关于血液灌流的实验研究也多起来,但是目前这一治疗方法对体内敌草快的清除效果没有相关的实验研究,开展此方面的研究将对临床的治疗有较大的指导意义。目的:以比格犬为实验对象,致其敌草快中毒后,一组进行血液灌流治疗,另一组未采取任何治疗措施,观察记录实验犬的临床表现,采集各时间点的外周血检测其血液中的毒物浓度及肝肾功指标。染毒24h后处死动物解剖取脏器组织,检测脏器内敌草快浓度。通过对比两组实验动物的毒物浓度来探索急性敌草快中毒后给予血液灌流治疗的毒物清除效果,并且观察毒物在各脏器内的分布情况。检测肝肾功指标及肝脏、肾脏、肺组织病理,观察急性敌草快中毒早期的病理损伤,通过比较治疗组与染毒组的结果,探索血液灌流对敌草快中毒早期的治疗效果。方法:成年雄性健康比格犬12只,随机分为2组:A组(染毒组)、B组(血液灌流组),每组6只。在一系列初步实验后,确定给予静脉注射10%的敌草快30 mg/kg。在实验犬后肢放置留置针,以供给药物、取血、补液用。两组动物均在左侧股静脉置管建立血管通路,A组动物不再给予其他特殊处理,B组动物在给药2小时时进行血液灌流2小时。肝素钠用于血液灌流期间来抗凝,体外循环速度为40ml/min,最后注射鱼精蛋白来中和肝素以防止过多出血。采集比格犬染毒前及染毒后0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h血液,检测暴露后不同时间点血液中敌草快的浓度,并检测暴露前和暴露后2小时、4小时、24小时的肝肾功指标,其中B组2h和4h分别在血液灌流前后采集,上机前采外周静脉血,结束下机后采集标本,避免生理盐水和肝素对检测结果有干扰影响。当通过留置导管采集血液时,首先取5毫升血液再收集标本。24h后将实验犬深度麻醉后处死,取肝脏、肾脏、肺、心脏、小肠、脾脏组织,匀浆后取上清检测组织内敌草快浓度。取肝脏、肾脏、肺进行病理切片,包括HE染色和Masson染色。采用液质联用方法定量测定犬血浆和组织中敌草快的浓度,检测、记录各数据。检测数据表示为平均数±标准差,分析方法使用成组设计的t检验。统计软件采用spss17统计软件。P≤0.05被认为具有统计学意义。结果:(1)治疗组有3只实验动物在血液灌流治疗过程中出现抽搐,注意给动物保温,并未中止血液灌流。血液灌流结束后有2只实验动物置管处渗血明显,适量增加鱼精蛋白用量,增长按压时间后渗血好转。治疗组与染毒组分别有2只实验动物出现腹泻。所有实验动物在给药后24h观察时间内均无死亡。(2)比较两组实验动物各时间点的外周静脉血敌草快浓度数据得出:在血液灌流治疗之前,两组之间的敌草快浓度没有显著差异。在给予敌草快后4h,治疗组的敌草快浓度显著低于染毒组(P<0.05),两组中敌草快的浓度在暴露后6小时恢复到相似水平(P>0.05),直至24小时内的每个时间点,两组实验动物的敌草快快浓度无统计学差异(P>0.05)。(3)比较两组实验动物染毒24h心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、小肠组织内敌草快浓度数据得出:接受过血液灌流治疗的实验动物与未接受任何治疗处理的实验动物相比,在染毒24h后,心脏、肝脏、脾脏、肺脏和小肠中敌草快的浓度没有统计学差异(P>0.05),治疗组肾脏敌草快的浓度显著低于染毒组(P<0.05);敌草快在肾脏内的含量远远高于其他脏器,肺内的敌草快浓度最低。(4)比较给药前(空白对照)及给药后2小时、4小时、24小时各实验动物的肝肾功能指标:给药后2小时,与空白对照相比,未处理组BUN显著增高(P<0.05);治疗组ALT AST BUN明显增高(P<0.05);治疗组与非治疗组之间无显著差异(P>0.05)。给药后4h,未治疗组ALP BUN Cr明显高于空白染毒组(P<0.05);治疗组ALPBUNCr明显增高(P<0.05);治疗组与非治疗组之间无显著差异(P>0.05)。给药后24h,与空白对照比较,未处理的各指标显著增高(P<0.05);治疗组AST ALT AST BUN明显增高(P<0.05);治疗组的BUN Cr显著低于非治疗组(P<0.05)。(5)将实验动物在给药24小时处死,取肝脏、肾脏、肺组织进行病理切片。染毒组肝脏HE染色显示肝细胞较多轻度水肿,细胞肿胀,胞质疏松;在较多的静脉腔及肝窦中可以看到较多以粒细胞为主的白细胞;组织中多处可见肝窦淤血;部分静脉腔内可见少量中性粒细胞,肝窦内广泛可见较多中性粒细胞,部分静脉周围结缔组织中可见少量中性粒细胞浸润;一些静脉周围的结缔组织松散,并伴有少量炎性细胞浸润;组织未见其他明显异常;肝脏Masson染色切片显示:组织未见明显纤维化。治疗组肝脏的HE染色切片显示部分肝窦充血和轻度炎性细胞浸润,未观察到明显的广泛细胞水样变性;肝脏Masson染色切片显示:组织未见明显纤维化。染毒组的肾HE染色切片显示肾小管上皮细胞肿胀,细胞质疏松,并且肾小管上皮细胞从基底膜分离;观察到少量肾小管上皮细胞水样变性;组织未见其他明显异常;肾脏Masson染色切片显示:组织未见明显纤维化。治疗组中,肾脏HE染色切片显示肾小管上皮细胞肿胀,少量肾小管上皮细胞观察到水样变性;肾脏Masson染色切片显示:组织未见明显纤维化。染毒组的肺HE染色切片显示组织中肺泡壁大量增厚,伴有大量炎性细胞浸润;血管管腔内可见较多白细胞;组织中有多处肺泡壁断裂,小肺泡合并成大的囊腔;剥脱的上皮样细胞可见于局部肺泡腔;组织未见其他明显异常。肺Masson染色切片显示:在增厚的肺泡壁上有较多被染成蓝色的胶原增生。治疗组的肺HE染色切片显示广泛炎性细胞浸润,未观察到有广泛的肺泡壁断裂;肺Masson染色切片显示:增厚的肺泡壁上较多蓝色着染胶原增生。结论:静脉染毒的方法操作简单、剂量可以精确控制。血液灌流治疗后可明显降低血液中的毒物浓度,接着短时间内血药浓度出现明显反弹至与非治疗组相似的浓度,直至24h,两组动物的血药浓度无明显差别。染毒24h的脏器组织浓度显示,接受血液灌流治疗组的实验动物肾脏内敌草快浓度明显低于未接受血液灌流组的。在敌草快的急性中毒早期给予血液灌流治疗是很关键的。给药后2h,两组实验动物肝肾功指标即出现异常,给药4h各指标异常进行性加重,治疗组与非治疗组间无明显差异;给药后24h,两组动物的各指标均出现明显异常,治疗组与非治疗组相比BUN Cr明显较低。染毒24h的病理显示,敌草快中毒早期肺脏出现胶原增生,肝脏、肾脏出现不同程度的细胞水样变、炎性反应等病理变化。