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氨肽酶N(APN)与原发肿瘤和继发肿瘤的生长、血管生成密切相关,甚至对肿瘤细胞的增殖分化过程亦起促进作用,抑制APN的活性可以有效的阻断肿瘤的侵袭和转移,因此,APN已成为抗肿瘤药物研究的靶点之一。酶生物色谱法是分子生物色谱法的一种,它以酶为色谱固定相,使效应成分的分离与筛选结合在一起,可以从混合物中筛选特定的效应成分。本课题以APN为靶点,制备了新的APN固定相,建立了APN的酶生物色谱法,为抗肿瘤药物的研究开发提供了新的筛选模型。全文分四章,主要研究工作和成果如下：1.采用组织提取法,以猪肾为原料,制备APN,采用盐析、柱层析技术进行了纯化,并对其生物化学和有关酶学性质进行了研究。结果表明,酶经纯化后比活为10.08 U/mg,酶得到了较好的分离纯化,能满足实验的要求。APN最适温度为50℃,在50～55℃范围内相对稳定性；最适pH为7.8,偏弱碱性；阳性抑制剂Bestatin的半数有效抑制浓度为10.351μM；以L-亮氨酰-p-硝基苯胺为底物,测得其Km值为0.55 mM。2.制备硅胶整体柱,并进行包覆和修饰,以其为载体对APN的固定化条件进行了研究,并对固定化APN的性质进行了研究。结果表明酶固定化的最佳pH为7.8,酶量为40 ml,反应时间为6 h；酶经固定化后,最适pH不变,仍为7.8,pH稳定范围增加,最适温度为55℃,稳定性增加。3.建立APN的酶生物色谱筛选模型,以Bestatin为阳性对照,对模型进行了验证,并采用此模型对35个新化合物进行了筛选。结果表明,在该筛选模型中,Bestatin对APN的抑制作用具有明显的量-效关系,存在浓度依赖性,证明该筛选模型可行；采用此模型进行筛选,为进一步的化合物结构修饰提供有效信息。