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目的:抑制消减杂交技术大规模克隆胃癌下调基因，揭示参与胃癌发生发展的多基因分子机制；明确胃癌下调全长新基因GDDRcDNA的特性、GDDR染色体基因组DNA的结构及其基因调控区，判断其转录因子及结合部位，探讨GDDR的功能作用。
方法:将已建立的五人份正常胃粘膜mRNA(Tester)抑制消减杂交胃癌mRNA(Driver)的差异表达文库，电转化感受态细菌DH5a后，用PCR判断其阳性插入片段，克隆菌转膜反向杂交阳性克隆测序；对860阳性差异表达克隆测序，测序结果GenBank同源性比较，明确其基因类别、名称；25例病人胃癌及其对应正常胃粘膜组织RNART-PCR分别证实GDDM、GDDR、EEF1基因其下调程度；分析低丰度表达的胃癌下调基因与胃癌发生发展的关系。我们2002年马拉松的GDDRcDNA全长，与人类基因组DNA同源性比较、GenBank核苷酸库进行Blast搜索杂交，并参照正常胃cDNA马拉松文库中PCRGDDRcDNAORF区克隆的测序结果，对新基因GDDRcDNA全长序列，开放读框(ORF)序列进行修正；GDDR在胃癌与正常胃粘膜RNA的Nothernblot，地高辛标记GDDR,行GDDRmRNA的胃粘膜原位杂交定位，在人体多种组织cDNA文库中扩增GDDR的表达；生物信息技术分析GDDR基因结构、染色体定位，并对其推导蛋白性质与功能进行分析；采用Genomatix的启动子分析软件Gene2promoter,转录因子结合部位分析软件Matinspector,研究GDDR基因DNA5侧翼区调控GDDRcDNA的启动子区和转录因子及其结合部位。克隆GDDRORF至PUU18载体，测序正确后亚克隆GDDRORF至pcDNA3.1/Myc-His(-)A载体，将其与空载pcDNA3.1/Myc-His(-)A载体分别稳定转染胃癌7901细胞系，RT-PCR证实GDDR转染细胞GDDR的表达，行生长曲线及MTT检测，形态学分析结果。
结果:筛选到12个胃癌下调表达基因，它们在860阳性差异表达克隆中出现的频率1-4不等，选择GDDM、GDDR、EEF13个基因进行RT-PCR，结果均分别证明它们在胃癌中表达缺失或较正常胃粘膜下调6-10倍以上。我们2002年克隆递交GenBank的750bp的GDDRcDNA5端头22bp碱基为错配序列，去除22bp错配碱基后5端头再延长98bp碱基，至GDDRcDNA全长变为826bp,GDDRcDNAORF第88位G变A(GGC/AGC,G-S)，第476位G变A(AGT/AAT,S-N)；Nothernblot证实新基因GDDR在胃癌中表达缺失或明显下调，NBT/BCIP显色表明，GDDR位于正常胃粘膜上皮细胞胞内,GDDR仅在胃组织中表达；GDDR的基因组DNA从47996034开始，47988296结束，共由6个外显子，5个内含子组成，总长7739bp,启动子调控区域长约618bp,位于47996453至47995836，在转录起始位点的+96bp，和-419bp；NKx-2,SRY,AML-1a转录因子的结合位点分别在启动子的256-262位TCAAGTG，548-554位TTTGTTT,352-357位TGTGGT，预测概率100％；GDDR与胃组织特异、胃癌候选抑癌基因CA11在染色体基因组DNA相差仅仅21701bp，即均位于2p13.3，其基因组DNA结构与cDNA结构极为相似，调控区大小与范围也很接近，但其调控区序列不同，转录因子及其结合部位也不尽相同或区别较大，其中CA11预测概率99％的GATA-1，TBX5，deitaEF1转录因子结合位点分别在启动子438-441GATA，447-452AGGTGT,431-435AGGTG。编码蛋白前有一跨膜肽区结构的GDDR，与分泌蛋白CA11为同源蛋白，均为新的BRICHOS家族成员。GDDR稳定转染胃癌7901细胞系表达GDDRmRNA，生长曲线及MTT检测均表明，GDDR显著抑制胃癌7901细胞的生长(72h，0.341±0.014bvs0.488±0.015A，P＜0.01)，较对照组空载转染7901细胞，GDDR稳定转染胃癌7901细胞系细胞表型发生了变化。
结论:筛选到12个低丰度表达胃癌下调基因，它们很可能参与胃癌的发生发展过程。GDDRcDNAORF第88位G变A(GGC/AGC,G-S)，第476位G变A(AGT/AAT,S-N)；GDDRcDNA全长延伸至826bp，GDDR基因组DNA位于47996034，47988296,全长7739bp，与CA11相距21701bp，均在染色体2p13.3。GDDR启动子调控区域长约618bp，在转录起始位点的+96bp，和-419bp；GDDR预测概率100％的NKx-2,SRY,AML-1a转录因子结合位点分别在启动子256-262(TCAAGTG)，548-554(TTTGTTT)，352-357(TGTGGT)。编码蛋白前有一跨膜肽区结构的GDDR，与分泌蛋白CA11为同源蛋白。具有胃组织特异性的、胃癌下调全长新基因GDDR位于正常胃粘膜细胞，能显著抑制胃癌细胞的生长，它为人类存在的又一崭新的保守BRICHOS家族中，除CA11外又—胃癌相关的新基因。