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膀胱癌是一种常见的恶性肿瘤,具有较高的发病率和复发率。目前已有少数使用全基因组关联研究(GWAS)筛选膀胱癌发病相关基因的报道,而尚未见通过该方法筛选膀胱复发相关基因的报道。本课题通过“膀胱癌发病相关基因的验证”和“膀胱癌复发相关基因位点的筛选”两个部分的研究,验证了部分已被报道的膀胱癌发病相关位点,并筛选出了部分膀胱癌复发相关位点,同时明确了GWAS作为膀胱癌复发相关基因筛选方式的可行性。第一部分膀胱癌发病相关基因的验证目的：通过以全基因组关联研究(GWAS)为核心的分子遗传学手段,结合临床资料的总结与分析,在中国人群中验证部分已经被报道的可能与膀胱癌发病有关的单核苷酸多态性(SNP)位点,同时探讨在中国人群中使用该方法研究不同组别人群间基因差异的可行性。材料和方法：自2010年起于复旦大学附属华山医院泌尿外科招募膀胱癌患者共164名(均经病理学检验证实为尿路上皮癌),在告知患者实验目的、征得患者同意并签署知情同意书的情况下,采取每名患者静脉血5ml,另外选取1008名经确认未罹患肿瘤的健康对照志愿者,同样在签订知情同意书之后,每人抽取5ml静脉血。选取目前已经被报道过的16个可能与膀胱癌发病有关的SNPs作为重点关注对象。膀胱癌患者及健康对照志愿者提供的5ml静脉血置入乙二胺四乙酸二钾(EDTA)抗凝管中,立刻混匀,离心,吸除血清,获得血细胞,提取外周血样本总RNA,逆转录得到cDNA的并纯化,合成cRNA,纯化、标记并片段化,行芯片杂交,最终进行芯片扫描。对上述患者进行详细的临床资料总结,包括姓名、性别、年龄、吸烟史、初次确诊日期、术中所见、术后病理结果。对健康对照志愿者,同样登记姓名、性别、年龄、吸烟史等资料,并将之与患者的资料进行对比。使用PLINK软件,对数据进行分析,行Fisher确切概率法检验,根据检验结果,对上述SNPs基因型的分布进行Hardy-Weinberg (HWE)平衡检验。同时应用Logistic回归模型,校正年龄、吸烟史等因素,计算比值比(OR)和95%置信区间。结果：通过对患者组及对照组临床资料的分析,我们确定,两者在性别、年龄、吸烟史等方面无统计学差异。通过对膀胱癌患者及健康对照志愿者在上述16个SNPs中的比较,我们发现了2个在患者组与对照组之间,等位基因分布存在统计学差异的SNPs,他们分别是位于4号染色体短臂1区6带,定位于tacc-3基因的第5个内含子中的rs798766(C>T,p=0.00163)和位于8号染色体长臂2区4带,定位于myc基因上游约的rs9642880(G>T,p=0.04587)。同时还发现具有存在统计学差异潜质的SNP——定位于psca基因的第1个外显子中的rs2294008(C>T)。结论：rs798766、rs9642880以及rs2294008在患者组和对照组之间表现出了不同程度的等位基因分布差异性,这提示上述SNPs有望成为膀胱癌的基因诊断标志。同时,这一部分的研究证明,通过GWAS技术在中国人群中,寻找不同组别见部分SNPs等位基因分布的差异是切实可行的。第二部分膀胱癌复发相关基因位点的筛选目的：以上述第一部分的研究结果作为基础,通过以GWAS为核心的分子遗传学手段,结合临床资料的总结与分析,在中国人群中筛选可能与膀胱癌复发有关的单核苷酸多态性(SNP)位点,同时探讨以基因芯片作为核心技术,在中国人群中筛选膀胱癌复发相关基因位点的可行性。材料与方法：选取上述164名膀胱癌患者,根据其膀胱癌复发与否,分为复发组(40人)和非复发组(124人),将他们提供的5ml静脉血置入乙二胺四乙酸二钾(EDTA)抗凝管中,立刻混匀,离心,吸除血清,获得血细胞,提取外周血样本总RNA,逆转录得到cDNA的并纯化,合成cRNA,纯化、标记并片段化,行芯片杂交,最终进行芯片扫描。仍然选取目前已经被报道过的16个可能与膀胱癌发病有关的SNPs作为重点关注对象。对上述患者进行详细的临床资料总结,包括姓名、性别、年龄、吸烟史、初次确诊日期、术中所见(肿瘤数目、形态、大小等)、术后病理结果、复发时间、复发次数,并将复发组与非复发组的资料进行对比。使用STATA12.0和PLINK软件,对数据进行分析,行χ2检验Fisher确切概率法检验,根据检验结果,对上述SNPs基因型的分布进行Hardy-Weinberg(HWE)平衡检验。同时应用Logistic回归模型,校正年龄、吸烟史等因素,计算比值比(OR)和95%置信区间。结果：通过对复发组和非复发组临床资料的分析,我们确定,两者在性别、年龄、吸烟史、肿瘤的分期、分级、手术方式的选择等方面无统计学差异。通过对复发组和非复发组在上述16个SNPs中的比较,在基因型比较中,我们发现了2个SNPs的特定基因型对膀胱癌的复发具有保护作用,它们分别是位于8号染色体短臂2区2带的rs1495741(GG基因型,p=0.013)以及位于19号染色体长臂1区3带的ercc-2基因中的rs13181(GT基因型,p=0.024)；在等位基因分析中,我们发现位于19号染色体长臂1区3带上的ccne-1基因中的rs8102137在复发组与非复发组间,等位基因分布存在统计学差异(T>C,p=0.03)。结论：rs1495741、rs13181、rs8102137在复发组和非复发组之间表现出了基因型或等位基因分布的差异性,这提示上述SNPs有望成为膀胱癌复发的基因诊断标志。同时,这一部分的研究证明,通过GWAS原理,以基因芯片作为核心技术,在中国人群中筛选膀胱癌复发相关基因位点同样是切实可行的。