紫地榆提取物防龋活性的动物实验研究

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目的:通过对大鼠磨牙龋损等级划分,切牙牙釉质、牙本质硬度测量,切牙龋损脱矿研究,切牙龋损荧光带测量,切牙表面致密度等研究紫地榆的乙酸乙酯、正丁醇提取物在体内是否有防龋的作用;同时分离紫地榆乙酸乙酯提取物的主要成分,为深入研究紫地榆的防龋作用做进一步分析。方法:1紫地榆不同提取物体内给药得到样品:以SD大鼠为实验对象,通过给大鼠喂养致龋饲料、植入变形链球菌,加速使大鼠牙齿发生龋损,再每天2次给大鼠牙齿涂抹2 mg/m L紫地榆乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、0.1%Na F溶液、蒸馏水连续30 d,对比用正常饲料饲养不给药的大鼠,得到磨牙和切牙,分别做不同的实验。2体视显微镜大鼠磨牙龋损等级划分:以SD大鼠磨牙为实验对象,先用4mg/m L紫脲酸铵液染色染色36 h,用牙科打磨机沿牙远近中心向矢状半切,参考Keyes法,在体视显微镜下观察磨牙染色情况,进行龋损等级划分。3显微维氏硬度计测量大鼠切牙硬度:以SD大鼠切牙为实验对象,用镶嵌粉包埋好样品,在显微维氏硬度计下,分别测量紫地榆乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、Na F组、蒸馏水组和正常组切牙牙釉质和牙本质的显微硬度。4 PLM观察大鼠切牙龋损带:以SD大鼠切牙为实验对象,通过包埋、切片,得到400μm切牙样品,在偏光显微镜下观察紫地榆乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、Na F组、蒸馏水组和正常组切牙的龋损情况。5 CLSM测量大鼠切牙龋损荧光量:以SD大鼠400μm切牙为实验对象,通过0.1 mmol/L罗丹明B染色,在CLSM下观察大鼠切牙的龋损带,计算龋损荧光面积、总荧光量和平均荧光量。6 SEM观察大鼠切牙表面致密度:以SD大鼠切牙为实验对象,固定喷镀铂金膜后,在扫描电子显微镜下观察紫地榆乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、Na F组、蒸馏水组和正常组切牙的表面致密度。7紫地榆乙酸乙酯提取物主要成分的分离与鉴定:先将样品用氯仿甲醇完全溶解,用内径0.3mm,长100mm的玻璃点样毛细管吸少量样品,在GF254薄层硅胶板上点样,用10:1的氯仿甲醇溶液展开,上样,得到粗段后,对每段进行细分,用硅胶柱、2m高的葡聚糖凝胶柱以1:1的氯仿甲醇溶液的试剂分离纯化样品,再用NMR打谱得到碳谱和氢谱,分析波谱数据,再结合其物理性质进行结构鉴定。结果:1在整个实验中大鼠身体状况良好,体重基本稳定。2体视显微镜大鼠磨牙龋损时发现,与蒸馏水组对比,紫地榆乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组和Na F组无论是光滑面还是窝沟龋损,评分都明显更低,有统计学的意义(P<0.05),紫地榆乙酸乙酯、正丁醇提取物组和Na F组间无统计学意义(P>0.05),说明紫地榆乙酸乙酯、正丁醇提取物能降低磨牙龋损,且效果与Na F相差不大。3显微维氏硬度计测量大鼠切牙硬度时发现,紫地榆乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、Na F组牙釉质硬度均比蒸馏水组高,且有统计学意义(P<0.05),但硬度值均低于正常组,有统计学意义(P<0.05),各组间无统计学差异(P>0.05);在牙本质硬度中实验组和Na F组与蒸馏水组相比无统计学意义(P>0.05),但硬度值均低于正常组,有统计学意义(P<0.05)。说明紫地榆乙酸乙酯、正丁醇提取物能提高牙釉质硬度,效果不弱于Na F,但对比正常组还有差异。4 PLM观察大鼠切牙龋损带发现,紫地榆乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、Na F组、正常组均有不同程度的暗色条带或斑点,但明显比蒸馏水组少,程度比蒸馏水组轻,且紫地榆乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、Na F组能观察到再矿化带,蒸馏水组和正常组均没有,说明紫地榆乙酸乙酯、正丁醇提取物有再矿化效果。5 CLSM观察测量大鼠切牙龋损荧光量,发现紫地榆乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、Na F组、正常组的荧光较暗,荧光条带较短,没有蒸馏水组明显,统计分析龋损的荧光面积、总荧光量、平均荧光量发现,组荧光量比蒸馏水组低,且有统计学意义(P<0.05),而各组间无统计学差异(P>0.05),说明紫地榆乙酸乙酯、正丁醇提取物降低切牙龋损,效果和Na F相差不大。6 SEM观察大鼠切牙表面致密度,发现紫地榆正丁醇提取物组表面最光滑致密,几乎无裂缝,紫地榆乙酸乙酯提取物组、Na F组表面存在裂缝,但裂缝较少,蒸馏水组裂缝较多,且裂缝开口较大,正常组有裂缝,但观察不到裂口。Na F组表面存在球形沉积物,说明紫地榆乙酸乙酯、正丁醇提取物有再矿化效果。7首次从紫地榆中分离出齐墩果酸3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷、Oleanolic acid3-O-caffeate、山萘酚。结论:紫地榆乙酸乙酯、正丁醇提取物在动物体内有较好的防龋作用,效果与Na F相比差异不大。紫地榆的化学成分中含三萜类化合物。
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