幼年强直性脊柱炎外周血T淋巴细胞亚群分析及相关标记物的筛选和鉴定

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目的分析幼年强直性脊柱炎外周血T淋巴细胞亚群及相关细胞因子的变化特点和意义,探讨其与疾病发生发展的关系和作用机制,并筛选相关生物标记物作为早期诊断,评估疾病进展及活动性的指标。方法选择2009年7月至2012年9月在我住院部与门诊诊断明确且具有完整病例资料的幼年强直性脊柱炎(JAS)患儿33例。诊断标准按国际风湿病学联盟对儿童时期风湿性疾病新分类中的诊断标准,并参考施桂英总结的儿童强直性脊柱炎9条参考标准。其中男25例,女8例,男女之比为3.1:1;年龄5-14岁,平均9.2岁;病程3月~3年;均排除生长疼、过度活动史、银屑病家族史;强直性脊柱炎(AS)家族史9例。选取在本院儿科门诊体检的20例健康儿童作为对照组。采用流式细胞仪对JAS患者组和健康对照组外周血T淋巴细胞亚群CD3+T、CD4+T、CD8+T比例及CD4+/CD8+的比值进行检测;采用酶联免疫双抗体夹心法(ABC-ELISA)检测血清中各亚群主要作用因子IL-4、IL-12、TNF-A的水平,对差异有统计学意义的细胞因子用Spearman相关性检验分析其与幼年强直性脊柱炎病情活动的相关性。所得实验数据均结合影响因素分组进行统计学分析,探讨淋巴细胞亚群及相关细胞因子的参与JAS的发生机制和意义。采用SPSS13.0统计软件分析所得实验数据。所有计量资料数均以(X±s)表示;t检验比较两组变量间的差异,采用Spearman等级相关方法分析变量之间的相关性;不符合正态分布或方差齐性的则采用秩和检验。检验水准a=0.05,P<0.05为差异具有统计学意义,P<0.01为差别显著。结果1..JAS患儿组与对照组外周血中T淋巴细胞亚群的表达的比较JAS患者CD4+T淋巴细胞的百分率及CD4+/CD8+的比值均明显高于健康对照组,差异显著(P<0.01),;CD8+T淋巴细胞百分率明显低于健康对照组(P<0.05);CD3+T淋巴细胞的百分率低于健康对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。2. HLA-B27阳性JAS患儿组与HLA-B27阴性患儿者组比较HLA-B27阳性的JAS患儿CD4+T淋巴细胞的百分率高于HLA-B27阴性的患儿,差异有统计学意义,其他亚群在两者间无明显差异。3.按照病情进展JAS患儿各组外周血中T淋巴细胞亚群的表达的比较JAS患儿早期外周血中T淋巴细胞亚群就发生改变,CD3+T、CD8+T淋巴细胞的百分率呈下降趋势,CD4+T淋巴细胞的百分率及CD4+/CD8+的比值呈上升趋势,趋势与疾病的进展成正相关。但需要着重注意的是,JAS患儿早期CD4+T淋巴细胞的百分率低于对照组。4.T淋巴细胞相关细胞因子TNF-a、IL-4、IL-12在疾病不同活动期表达水平的比较TNF-a在JAS患儿对照组、稳定期和活动期血清中的水平呈上升趋势,活动期明显高于对照组(P<0.05); IL-4水平在活动期和稳定期都明显低于对照组(P<0.05),活动期下降更显著,但两者间差异无统计学意义;IL-12水平在JAS患儿中对照组、稳定期和活动期血清中的水平有较低幅度的上升趋势,但各组间数据间的差异无统计学意义。5.TNF-a、IL-4及CRP、ESR与病情活动的相关性分析JAS患者血清中TNF-a的水平和疾病活动性指数(ASDAS)和CRP呈正相关;IL-4水平与疾病活动性指数(ASDAS)成显著负相关(r=-0.6467,P<0.01),与炎症活动指标ESR呈负相关(r=-0.308,P=0.024),但与CRP无明显相关性.IL-4水平的变化对于辨别JAS疾病活动性高低能力均优于ESR和CRP。结论1.疾病早期患儿免疫功能低下,不利于形成有效的自身耐受,是JAS起病的机制之一;2.T细胞亚群失常以CD4+T淋巴细胞亢进为主导是JAS疾病发生发展的核心免疫机制;3.TNF-a和IL-4的水平与JAS疾病活动性显著相关,更有效反映JAS的发生和病情进展。
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