论文部分内容阅读
目的：希望将基因治疗引入我们今后治疗和/或防止感音神经性耳聋的努力方向，摸索向耳蜗内转染基因的方法和途径，为今后进一步实验和临床应用作前期基础和预备实验。同时也提高自己的分子生物学理论水平和实验技能。 方法：首先克隆昆明小鼠耳蜗组织的神经营养因子BDNF和NT3基因，并进行测序鉴定；分别与原核表达载体pDH、真核表达载体pCDNA3和逆转录病毒载体pLNCX重组构建原核表达质粒pDH-NT3、真核表达质粒pCDNA3-NT3和逆转录病毒载体质粒pLNCX-BDNF；再用温度诱导的方法诱导重组原核表达质粒pDH-NT3产生相应的蛋白质分子NT3，以证明重组质粒的实验方法是可靠的；最后用阳性脂质体包裹重组真核表达质粒pCDNA3-NT3，通过瞬时转染的方法将NT3基因转染到人淋巴瘤细胞Jurkat中，并进行筛选和传代培养，得到稳定的NT3基因工程细胞，以一定的数量移植到近交小鼠BALB/C的脑脊液中，数十天后比较移植前后BALB/C鼠的畸变产物耳声发射结果，初步观察分析脑脊液途径和NT3基因工程细胞对耳蜗功能有无作用。 结果：成功克隆出昆明小鼠耳蜗组织BDNF、NT3基因，并分别重组构建了原核表达质粒pDH-NT3、真核表达质粒pCDNA-NT3以及逆转录病毒表达质粒pLNCX-NT3；其中pDH-NT3经温度诱导表达出相应大小分子的NT3蛋白，pCDNA3-NT3转染体外培养的Jurkat细胞后获得稳定生长的NT3基因工程细胞，经脑脊液途径移植BALB/C小鼠，在个别频率上对耳蜗衰老有一定的延缓作用。 I 第四军医大学博士论文 结论：有关神经营养因子基因转染淋巴细胞构建相应的基因 工程细胞的方法是可行的，是今后进行构建原代淋巴细胞的基因 工程细胞，并一对一移植到动物耳蜗内治疗和／或防止各种感音神 经性聋的前期和预备实验，也是今后听力学临床应用神经营养因 子基因工程细胞的探索。