斑马鱼视神经再生早期相关microRNAs的鉴定与分析

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MicroRNAs(miRNAs)是一类长度为21-23个核苷酸的单链非编码RNAs,通过与靶mRNA的3’非翻译区互补序列的结合引起靶mRNA的降解或者抑制其翻译。miRNAs在生物体内起到非常重要的作用,它们可以参与细胞分化、细胞凋亡、神经元发育、脂类代谢和激素分泌等多种生理过程。视神经是指从视乳突到视交叉的一段视路,为特殊分化的中枢神经,主要由视网膜神经节细胞(RGCs)的轴突组成。因其具有操作方便的特性,从而成为了研究中枢神经系统的常用对象。斑马鱼作为研究神经发育与损伤后再生的重要模式动物,其视神经损伤后可以再生回到靶组织,形成与原来相同的视网膜-顶盖投射,恢复正常的生理功能。但是,人类视神经受损后其再生能力却很有限,近年来的研究表明在中枢神经损伤再生过程中miRNAs的表达发生了变化,因此探寻斑马鱼视神经损伤再生过程中相关miRNAs的调控功能,有助于为中枢神经损伤再生过程中的分子调控机理提供新的分子干预靶点。为全面了解斑马鱼视神经再生早期过程中相关miRNAs的调控功能,本研究采用了HiSeq 2500高通量测序平台,构建了正常斑马鱼(A)和视神经再生早期即视神经损伤1d后(B)2个小RNA (small RNA, sRNA)文库,对两个文库中的sRNA深度测序的数据进行了生物信息学分析,鉴定了视神经再生早期相关的miRNAs,并对这些miRNAs的表达情况和潜在功能进行了全面分析和预测。主要研究结果如下:1.由A、B 2个sRNA文库中分别获得高质量序列读数17,614,833和15,607,126。除去低质量读数、接头序列等后,两个文库中分别获得长度为17-46nt的纯净序列读数11,714,910和11,637,612,其中绝大多数的序列长度为21nt,这与miRNA长度的一般大小一致。A和B文库中与已知斑马鱼基因组匹配的序列数分别为99.71%和99.54%。2.两个文库中共鉴定到斑马鱼保守miRNAs 200种。其中,192种miRNAs在两个文库中共表达,1种仅在正常斑马鱼视网膜组织中表达,7种仅在视神经再生早期斑马鱼的视网膜组织中表达。其中,192种共表达miRNAs中有18种的表达在视神经再生早期的斑马鱼视网膜组织中显著上调,17种显著下调。3.通过Mireap软件进行预测,在两个文库中共发现26种新的miRNA.其中有14种在两个斑马鱼视网膜组织中均表达,8种仅在正常斑马鱼的视网膜组织内表达,4种仅在视神经再生早期的斑马鱼视网膜组织内表达。4.分别对两个文库中15种高丰度和35种差异表达miRNAs的1,580、1,416种预测靶基因进行了生物信息学分析。KEGG通路分析显示,预测的靶基因在神经发育、细胞生物学相关过程中富集,表明了高丰度及差异表达的miRNAs在斑马鱼视神经再生早期过程中的潜在作用,进一步验证了我们的测序结果。
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