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目的:本研究通过建立大鼠颈总动脉球囊损伤术后动脉粥样硬化(AS)模型,模拟临床中PTCA术后再狭窄(RS),观察豁痰解毒通络饮对球囊损伤术后AS模型的干预作用,探究痰解毒通络饮是否通过内质网应激(ERS)-自噬信号通路抑制动脉粥样硬化的形成。方法:5周龄SPF级雄性Sprague-Dawley大鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为假手术组、球囊损伤组、豁痰解毒通络饮组、阿托伐他汀组。使用2F Fogarty球囊建立大鼠左侧颈总动脉球囊损伤模型。术后,治疗组分别予以豁痰解毒通络饮和阿托伐他汀灌胃,假手术组及球囊损伤组则给与等体积纯净水灌胃。于术后第28天,提取各组大鼠损伤段颈总动脉组织。苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠颈动脉血管病理重构情况;马松(Masson)染色法观察各组大鼠损伤侧颈动脉壁组织纤维化程度;免疫组织化学法(IHC)检测各组大鼠损伤侧颈总动脉血管中增殖细胞核抗原(PCNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及内质网应激标志信号分子CRP78、PERK的阳性细胞表达百分率;透射电子显微镜观察损伤段颈总动脉壁超微结构变化情况;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测:1.测定各组大鼠损伤段颈总动脉组织中内质网应激标志信号因子GRP78、PERK、el IF2a、CHOP的m RNA表达水平;2.测定各组大鼠损伤段颈总动脉组织中自噬关键信号因子m TOR,LC3B,ATG7、Beclin-1的m RNA表达水平。蛋白免疫印记实验(Western blot)检测:各组大鼠损伤段颈总动脉组织中内质网应激标志信号因子GRP78、p-PERK、PERK、el IF2a、CHOP以及自噬关键信号因子m TOR、LC3B、ATG7、Beclin-1的蛋白表达水平。结果:1.HE结果显示:假手术组的大鼠颈总动脉内皮结构完整而光滑,组织排列均匀且规律,仅由一层扁平的血管内皮构成;球囊损伤组的大鼠损伤侧颈总动脉内膜较为致密且排列紊乱,其新生内膜使血管壁显著增厚,管腔面积明显变窄。数据统计表明,与假手术组相比,球囊损伤组的新生内膜面积(NIA)和NIA/中膜面积(MA)比值明显升高(P<0.01),而豁痰解毒通络饮组和阿托伐他汀组的NIA和NIA/MA比值明显低于模型组(P<0.01),管腔狭窄情况得到明显改善。2.Masson染色结果显示:假手术组的颈总动脉经染色后组织呈现出以富含肌纤维的红色为主;而模型组损伤侧的颈总动脉内膜明显增厚,且血管壁呈现出以胶原纤维为主的蓝染,与假手术组相比,胶原容积分数(AVF)显著增高(P<0.01);而豁痰解毒通络饮组和阿托伐他汀组与球囊损伤组比较,胶原纤维的蓝染情况明显减少,AVF值则明显降低(P<0.01),表明豁痰解毒通络饮能有效延缓PTCA术后动脉纤维化进程;3.免疫组织化学法结果显示:(1)假手术组并未观察到明显的棕黄色PCNA阳性表达颗粒,而α-SMA的阳性表达则较为显著;与假手术组相比,球囊损伤组血管壁中PCNA阳性表达颗粒的平均光密度值(IOD)较假手术组显著升高(P<0.01),而α-SMA的IOD值明显降低(P<0.01),表明球囊损伤促进了颈总动脉内膜平滑肌细胞的增殖和细胞表型转换;与球囊损伤组比较,豁痰解毒通络饮组和阿托伐他汀组PCNA的IOD值均显著降低(P<0.01),而α-SMA的IOD值则明显升高(P<0.01);这表明豁痰解毒通络饮能够抑制球囊损伤后血管平滑肌的增殖;(2)在假手术组中无明显的棕黄色CRP78、PERK阳性表达颗粒;与假手术组比较,球囊损伤组内膜明显增厚,管腔狭窄严重,新生内膜可见大量棕黄色颗粒,CRP78、PERK的IOD值均显著升高(P<0.01);与模型组比较,豁痰解毒通络饮组和阿托伐他汀组中CRP78、PERK的阳性表达颗粒则明显减少,两组的IOD值也均显著降低(P<0.01),表明豁痰解毒通络饮组可抑制损伤血管内质网应激的激活;4.透射电镜结果显示:假手术组大鼠颈总动脉新生内膜中未发现内质网肿胀和自噬小体;与假手术组相比,球囊损伤组的颈总动脉新生内膜中可见内质网水肿明显,自噬小体和自噬溶酶体的数量也显著增加;而两组药物治疗组的自噬小体及自噬溶酶体较模型组明显减少,表明豁痰解毒通络饮有效降低了内质网的应激负荷,促进稳态的恢复;5.Real-time PCR检测结果显示:与假手术组相比,模型组大鼠颈总动脉组织中ERS标志信号分子GRP78、PERK、e IF2α、CHOP以及自噬标志信号分子LC3B,ATG7、Beclin-1m RNA的表达水平显著升高(P<0.01),而m TOR的m RNA表达水平却显著降低(P<0.01);而与球囊损伤组相比较而言,两药物治疗组大鼠颈动脉组织中ERS信号因子GRP78、PERK、e IF2α、CHOP以及自噬信号因子LC3B,ATG7、Beclin-1的m RNA的表达水平则明显降低(P<0.01),而m TOR的表达水平显著升高(P<0.01),表明豁痰解毒通络饮可以在基因水平有效抑制球囊损伤血管ERS-自噬的过度激活。6.Western blot检测结果显示:与假手术组相比,模型组大鼠颈总动脉组织中ERS标志信号因子GRP78、p-PERK、PERK、el IF2a、CHOP以及自噬关键信号因子LC3B,ATG7、Beclin-1的蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而自噬蛋白分子m TOR的表达水平则显著降低(P<0.01);与模型组比较,药物组颈动脉组织中GRP78、p-PERK、PERK、el IF2a、CHOP以及自噬关键信号因子LC3B,ATG7、Beclin-1分子的表达水平均显著降低(P<0.01),而m TOR蛋白的表达水平则显著升高(P<0.01),表明豁痰解毒通络饮可以在蛋白水平有效的抑制球囊损伤颈动脉ERS-自噬的过度激活。结论:1.本研究成功建立了大鼠颈总动脉球囊损伤术AS模型,可用于临床PTCA术后新动脉粥样硬化形成导致的血管再狭窄性疾病的研究;2.豁痰解毒通络饮可明显减轻管壁组织纤维化程度,并显著抑制了球囊损伤血管平滑肌的增殖和表型转换,对术后新内膜形成具有显著的抑制作用,有效的改善了PTCA术后损伤颈动脉AS的进展;3.在球囊损伤术后AS模型中,ERS-自噬信号通路被过度激活;豁痰解毒通络饮能够有效的抑制该模型中球囊损伤动脉管ERS-自噬信号通路的过表达;4.我们推测豁痰解毒通络饮对PTCA术后AS的抑制作用可能是通过抑制内质网应激-自噬的过表达而得以实现的,这为今后临床治疗PTCA术后AS提供了新的治疗靶点和应对策略。