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目的:课题组前期基因芯片结果显示:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)肿瘤坏死因子受体超家族13C(tumor necrosis factor receptor superfamily13C,TNFRSF13C)在侵袭性牙周炎牙龈组织中的表达比在健康牙龈组织中明显升高,提示其可能参与牙周炎的疾病过程。lnc RNA-TNFRSF13C与TNFRSF13C基因的内含子重叠,TNFRSF13C基因编码的是B细胞活化因子受体(B cell activating factor receptor,BAFF-R),也就是B细胞活化因子(B cell activating factor,BAFF)的特异性受体,BAFF-R是BAFF介导B细胞存活、成熟及活化的主要受体。本研究旨在通过检测不同类型牙周炎患者B细胞中lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R的表达水平;体外实验检测lnc RNA-TNFRSF13C对BAFF和BAFF-R的作用,及对B细胞功能的影响,初步探索lnc RNA-TNFRSF13C在牙周炎患者B细胞中的作用和可能的调控机制,为阐明牙周炎的发病机制提供新的实验依据。方法:1.获得患者知情同意后,收集健康志愿者、慢性和侵袭性牙周炎患者的血液样本,Ficoll-Paque分离法从全血样本中分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),再用MACS磁性细胞分选法从PBMCs中分离纯化CD19~+B细胞。提取细胞总RNA,通过实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)分别检测不同类型牙周炎患者B细胞中lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R的表达水平。2.获得患者知情同意后,收集健康志愿者的血液样本,按上述方法分离CD19~+B细胞,用于本部分及后续实验。体外培养B细胞,然后用10μg/ml的牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理细胞,24h后收集细胞,利用RT-PCR分别检测lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R表达水平的变化。3.体外培养B细胞,然后B细胞中分别转染lnc RNA-TNFRSF13C过表达质粒和lnc RNA-TNFRSF13C si RNA,检测细胞转染效率,并在转染完成后检测lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R表达水平的变化。4.分别用lnc RNA-TNFRSF13C过表达质粒和lnc RNA-TNFRSF13C si RNA转染B细胞,检测细胞转染效率,并在转染后用10μg/ml P.g LPS刺激细胞,检测B细胞的增殖和凋亡情况,同时分别在24h、48h和72h收集细胞上清液,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、免疫球蛋白A(immunoglobulin A,Ig A)和免疫球蛋白G(immunoglobulin G,Ig G)分泌水平的变化。结果:1.与健康对照组相比,lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R在慢性和侵袭性牙周炎患者B细胞中的表达明显升高(P<0.05),且lnc RNA-TNFRSF13C在侵袭性牙周炎患者中的表达与慢性牙周炎相比明显升高(P<0.05),而侵袭性牙周炎患者BAFF和BAFF-R的表达与慢性牙周炎相比明显降低(P<0.05)。2.与空白对照组相比,LPS刺激B细胞后lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R的表达均明显上升(P<0.05)。3.lnc RNA-TNFRSF13C过表达质粒sno-TNFRSF13C转染B细胞后,与空白载体组相比,sno-TNFRSF13C组中lnc RNA-TNFRSF13C的表达明显升高(P<0.05),而BAFF和BAFF-R的表达明显降低(P<0.05);lnc RNA-TNFRSF13C si RNA转染B细胞后,与阴性对照组相比,si-TNFRSF13C组中lnc RNA-TNFRSF13C的表达显著降低(P<0.05),而BAFF和BAFF-R的表达显著升高(P<0.05)。4.CCK8法检测B细胞的增殖,结果显示sno-TNFRSF13C组细胞增殖明显低于对照组(P<0.05),而si-TNFRSF13C组细胞增殖明显高于对照组(P<0.05);Annexin V-FITC/PI双染法检测B细胞的凋亡,与对照组相比,sno-TNFRSF13C组B细胞凋亡较高(P<0.05),而si-TNFRSF13C组显示细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。5.ELISA检测结果显示,sno-TNFRSF13C组在24h、48h和72h的TNF-α水平均显著低于对照组(P<0.05),而si-TNFRSF13C组在24h、48h和72h的TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.05)。24h和48h检测各组之间的Ig A和Ig G水平无明显差异(P>0.05);72h检测结果显示,与对照组相比,sno-TNFRSF13C组Ig A和Ig G的水平明显降低(P<0.05),而si-TNFRSF13C组Ig A和Ig G的水平明显升高(P<0.05)。结论:1.lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R在牙周炎患者B细胞中的表达升高,提示lnc RNA-TNFRSF13C及相关因子参与牙周炎的发生发展过程。2.过表达lnc RNA-TNFRSF13C能降低BAFF和BAFF-R的表达水平,并对细胞因子TNF-α及抗体Ig A和Ig G的分泌有抑制作用,说明lnc RNA-TNFRSF13C能抑制B细胞分化成浆细胞,阻碍B细胞对外界的防御功能。3.过表达lnc RNA-TNFRSF13C抑制B细胞增殖,同时促进B细胞凋亡,从而进一步妨碍B细胞的免疫功能,但具体调节机制仍需进一步研究。4.lnc RNA-TNFRSF13C在侵袭性牙周炎中的高表达,B细胞的功能受到影响,可能是侵袭性牙周炎发病原因之一。