lncRNA-TNFRSF13C对B细胞功能的调节作用和机制初探

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ktv238
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:课题组前期基因芯片结果显示:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)肿瘤坏死因子受体超家族13C(tumor necrosis factor receptor superfamily13C,TNFRSF13C)在侵袭性牙周炎牙龈组织中的表达比在健康牙龈组织中明显升高,提示其可能参与牙周炎的疾病过程。lnc RNA-TNFRSF13C与TNFRSF13C基因的内含子重叠,TNFRSF13C基因编码的是B细胞活化因子受体(B cell activating factor receptor,BAFF-R),也就是B细胞活化因子(B cell activating factor,BAFF)的特异性受体,BAFF-R是BAFF介导B细胞存活、成熟及活化的主要受体。本研究旨在通过检测不同类型牙周炎患者B细胞中lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R的表达水平;体外实验检测lnc RNA-TNFRSF13C对BAFF和BAFF-R的作用,及对B细胞功能的影响,初步探索lnc RNA-TNFRSF13C在牙周炎患者B细胞中的作用和可能的调控机制,为阐明牙周炎的发病机制提供新的实验依据。方法:1.获得患者知情同意后,收集健康志愿者、慢性和侵袭性牙周炎患者的血液样本,Ficoll-Paque分离法从全血样本中分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),再用MACS磁性细胞分选法从PBMCs中分离纯化CD19~+B细胞。提取细胞总RNA,通过实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)分别检测不同类型牙周炎患者B细胞中lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R的表达水平。2.获得患者知情同意后,收集健康志愿者的血液样本,按上述方法分离CD19~+B细胞,用于本部分及后续实验。体外培养B细胞,然后用10μg/ml的牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理细胞,24h后收集细胞,利用RT-PCR分别检测lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R表达水平的变化。3.体外培养B细胞,然后B细胞中分别转染lnc RNA-TNFRSF13C过表达质粒和lnc RNA-TNFRSF13C si RNA,检测细胞转染效率,并在转染完成后检测lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R表达水平的变化。4.分别用lnc RNA-TNFRSF13C过表达质粒和lnc RNA-TNFRSF13C si RNA转染B细胞,检测细胞转染效率,并在转染后用10μg/ml P.g LPS刺激细胞,检测B细胞的增殖和凋亡情况,同时分别在24h、48h和72h收集细胞上清液,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、免疫球蛋白A(immunoglobulin A,Ig A)和免疫球蛋白G(immunoglobulin G,Ig G)分泌水平的变化。结果:1.与健康对照组相比,lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R在慢性和侵袭性牙周炎患者B细胞中的表达明显升高(P<0.05),且lnc RNA-TNFRSF13C在侵袭性牙周炎患者中的表达与慢性牙周炎相比明显升高(P<0.05),而侵袭性牙周炎患者BAFF和BAFF-R的表达与慢性牙周炎相比明显降低(P<0.05)。2.与空白对照组相比,LPS刺激B细胞后lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R的表达均明显上升(P<0.05)。3.lnc RNA-TNFRSF13C过表达质粒sno-TNFRSF13C转染B细胞后,与空白载体组相比,sno-TNFRSF13C组中lnc RNA-TNFRSF13C的表达明显升高(P<0.05),而BAFF和BAFF-R的表达明显降低(P<0.05);lnc RNA-TNFRSF13C si RNA转染B细胞后,与阴性对照组相比,si-TNFRSF13C组中lnc RNA-TNFRSF13C的表达显著降低(P<0.05),而BAFF和BAFF-R的表达显著升高(P<0.05)。4.CCK8法检测B细胞的增殖,结果显示sno-TNFRSF13C组细胞增殖明显低于对照组(P<0.05),而si-TNFRSF13C组细胞增殖明显高于对照组(P<0.05);Annexin V-FITC/PI双染法检测B细胞的凋亡,与对照组相比,sno-TNFRSF13C组B细胞凋亡较高(P<0.05),而si-TNFRSF13C组显示细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。5.ELISA检测结果显示,sno-TNFRSF13C组在24h、48h和72h的TNF-α水平均显著低于对照组(P<0.05),而si-TNFRSF13C组在24h、48h和72h的TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.05)。24h和48h检测各组之间的Ig A和Ig G水平无明显差异(P>0.05);72h检测结果显示,与对照组相比,sno-TNFRSF13C组Ig A和Ig G的水平明显降低(P<0.05),而si-TNFRSF13C组Ig A和Ig G的水平明显升高(P<0.05)。结论:1.lnc RNA-TNFRSF13C、BAFF和BAFF-R在牙周炎患者B细胞中的表达升高,提示lnc RNA-TNFRSF13C及相关因子参与牙周炎的发生发展过程。2.过表达lnc RNA-TNFRSF13C能降低BAFF和BAFF-R的表达水平,并对细胞因子TNF-α及抗体Ig A和Ig G的分泌有抑制作用,说明lnc RNA-TNFRSF13C能抑制B细胞分化成浆细胞,阻碍B细胞对外界的防御功能。3.过表达lnc RNA-TNFRSF13C抑制B细胞增殖,同时促进B细胞凋亡,从而进一步妨碍B细胞的免疫功能,但具体调节机制仍需进一步研究。4.lnc RNA-TNFRSF13C在侵袭性牙周炎中的高表达,B细胞的功能受到影响,可能是侵袭性牙周炎发病原因之一。
其他文献
随着世界各地能源消耗的快速增长,寻找一种石油替代能源尤为重要,而油页岩因其丰富的资源储量和多元的利用方式,引起了各国的重视。本文以水热液化技术为基础,以辽宁抚顺油页
当下我国学校正处于转型性变革过程中,教研组作用的发挥越来越重要。然而,长期以来人们往往关注它作为一个“组织”形态的存在及其探究,而甚少关注教研组中教师的状态。在学
随着智能电子信息设备的快速发展,市场对高效率、高密度的开关电源方案需求十分旺盛。基于电力电子技术的开关电源由于功耗低、便携性、高效率等优点,得到了市场的青睐。由于
近几年,由于合成生物学在构建具有明确和可控性质的微生物方面取得的较大进展,使得人工合成混菌体系的设计和构建成为国内外专家的研究热点之一。2-酮基-L-古龙酸(2-KGA)是维生素C的前体,目前,国内外学者提出了多种提高Ketogulonicigenium vulgare菌株产2-KGA的策略,其中利用伴生菌以混菌形式共同培养时,可显著促进K.vulgare的产酸能力。K.vulgare菌株的生长和
我国法人人格否认制度自2005年成文法化后,在司法实践中已经得到广泛引用,并在债权人保护中发挥了一定的积极作用。然而,由于立法的抽象性和案件本身的复杂性等原因,该制度在
目的:肺腺癌转移相关转录本(metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)是细胞核核斑区的一种长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),全长约8kb,
在石油化工装置设计中,管道的设计是其中非常重要的一环。管线在设计和布置时除了要满足管道和仪表流程图的要求,还要兼顾管线和管线连接设备的安全性、经济性、稳定性和操作
商业银行在近年来出现了高管离职热潮,并且高管离职性质与以往存在显著差异。商业银行高管离职的原因及影响,目前已受到了社会舆论关注。国内外学者针对影响高管离职的因素、
随着我国电网容量不断增加,抽水蓄能电站凭借着电能回收效率高、响应迅速、使用寿命长的优势在电力调节中的作用越来越明显。进/出水口作为电站的重要组成部分直接关系到电站的效益。而明渠作为连接进/出水口与库区的纽带,其布置方式会直接影响明渠内的流态,进而影响进/出水口的运行。本文针对不同的进/出水口明渠布置方式,以多个实际工程为例,采用数值模拟方法,研究明渠环流特性。(1)对进/出水口明渠布置方式进行总结
新一代煤化工技术和开发适合我国国情的洁净煤技术对我国能源使用及环境问题解决具有重要意义,其中煤气化是现代煤化工的龙头。在不以制取焦油为目的煤炭加工过程中,焦油就成