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冬虫夏草又名虫草,夏草冬虫,是我国传统的药用珍品,与人参、鹿茸齐名,并列为中国三大补品。在国际上,尤其是港台和东南亚具有极高的商业信誉。它是麦角菌科真菌冬虫夏草菌[Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.]寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。本文对青海冬虫夏草的野外生境、核苷类化学成分、遗传多样性及不同产区的土壤微量元素的系统性分析,得到与冬虫夏草特定生长过程相关的些许因素,从而对冬虫夏草的人工培殖提供一定的理论依据,为解决冬虫夏草面临的严峻问题提供一些建议。
1、运用高效液相色谱法对青海15个样地的冬虫夏草进行核苷类成分的分析,包括尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和虫草素。色谱条件:SymmetryShieldTMRp18柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速0.2-1.2mL·min-1,检测波长260nm,柱温30℃。该方法高效灵敏,重现性好,能够为今后冬虫夏草核苷类成分的进一步研究提供很好的方法和依据。
2、运用毛细管电泳法对青海15个样地的冬虫夏草进行核苷类成分的分析,包括尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、虫草素和腺嘌呤。电泳条件:采用BeckmanP/ACETMMDQ高效毛细管电泳仪,熔融石英毛细管57cm×75μm,有效长度50cm(河北永年光纤厂),自动压力(500KPa)进样5s,检测波长254nm,分离电压20KV,温度25℃,运行缓冲液为0.2mol·L-1硼酸(5mol·L-1用氢氧化钠溶液调pH至8.5)。该方法快速简便,能很好的对6个核苷类成分进行分离。
3、采用ITS序列分析法对青海15个样地的冬虫夏草进行遗传多样性分析,结果表明:冬虫夏草种内差异较小,种间差异明显;采集的15份青海冬虫夏草样品大致可以分成3个分支,玉树地区与果洛地区各成一个分支,而海东地区、海南州和拉鸡山可大致归为一个分支。地理位置与纬度有关,分别是青海东北部地区、中东部地区和南部地区,呈现出明显的地域特征。
4、用主成分分析法探讨冬虫夏草核苷类成分与土壤微量元素的相关关系,结果表明:土壤中的Cd含量与核苷类成分呈显著正相关,Mg、P、Ni、Ca等几个主要成分与冬虫夏草的核苷类成分也有一定的相关关系。