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目的:通过无镁培养新生大鼠海马神经元诱发癫痫样放电模型,观察针刺血清对体外培养的癫痫样放电后海马神经元突起的生长发育情况,以及海马神经元内MAP-2蛋白、GAP-43蛋白在不同时间节点的表达情况,探讨针刺血清对惊厥性神经元损伤后突起可塑性影响的意义,为针灸防治脑损伤的基础和临床研究提供思路。方法:原代培养的新生大鼠海马神经元分为4组:正常组,无镁组,针刺血清组和非针刺血清组。神经元培养至第10天时,无镁组、针刺血清组和非针刺血清组将正常高糖DMEM培养液换成无镁细胞外液(无镁液),诱导神经元癫痫样放电。无镁组在无镁液作用3h后恢复正常培养液,分别于培养2h、12h、48h取材备用;针刺血清组在无镁液作用3h后加入含10%针刺血清培养液继续培养,分别于培养2h、12h、48h取材备用;非针刺血清组在无镁液作用3h后加入含10%非针刺血清继续培养,分别于培养2h、12h、48h取材备用;正常组不做任何处理,用原培养液继续培养,分别于相应时段取材备用。采用时差显微成像技术观察海马神经元不同时间节点的突起发育情况,采用免疫荧光法和Western-blot法观察海马神经元内不同时间节点MAP-2蛋白、GAP-43蛋白的表达情况。结果:1.时差显微呈像技术观察海马神经元突起生长发育情况:正常组照片中由胞体发出五支一级突起,并见二级突起、三级突起;无镁组由胞体发出两支一级突起,并见二级突起,未见三级突起,随着时间的推移胞体与突起都逐渐萎缩;针刺血清组由胞体发出四支一级突起,并见二级突起、三级突起;非针刺血清组由胞体发出三支一级突起,并见二级突起,未见三级突起,随着时间的推移胞体与突起都逐渐萎缩;2.免疫荧光学法检测MAP-2蛋白表达的情况:MAP-2蛋白主要表达在神经元细胞质与突起上,针刺血清组海马神经元突起部荧光最强。正常组中MAP-2蛋白在2h、12h、48h时间段内均有较高表达;与正常组比较,无镁组中MAP-2蛋白在三个时间段内的表达量均明显降低,差异有统计学意义(p<0.05);无镁组组内三个时间段比较,蛋白表达逐渐降低,2h与48h比较差异有统计学意义(p<0.05)。与无镁组比较,针刺血清组中MAP-2蛋白表达在各个时间段均明显增高,差异有统计学意义(p<0.05),非针刺血清组中MAP-2蛋白三个时间段的表达差异均无统计学意义;针刺血清组三个时间段组内比较,趋势差异无统计学意义(p>0.05)。与非针刺血清比较,针刺血清组MAP-2蛋白在三个时间段表达均明显增高,差异统计学意义(p<0.05)。3.免疫荧光学法检测GAP-43蛋白表达的情况:GAP-43蛋白主要表达在神经元细胞质与突起上,针刺血清组海马神经元突起部荧光最强。正常组中GAP-43蛋白在2h、12h、48h时间段表达均较低,与正常组比较,无镁组中GAP-43蛋白表达在2h有小幅增强(p>0.05),在12h、48h表达明显降低(p<0.05);无镁组组内三个时间段比较,蛋白表达逐渐降低,2h与48h比较差异有统计学意义(p<0.05)。与无镁组比较,针刺血清组中GAP-43蛋白表达在各个时间段均明显增高,差异有统计学意义(p<0.05),非针刺血清组中GAP-43蛋白三个时间段的表达差异无统计学意义;针刺血清组三个时间段组内比较,趋势差异无统计学意义(p>0.05)。针刺血清组与非针刺血清比较,GAP-43蛋白在三个时间段表达均明显增高,差异有统计学意义(p<0.05)。4.Western-blot法检测MAP-2蛋白表达的情况:正常组中MAP-2蛋白在2h、12h、48h时间段均有较高表达;与正常组比较,无镁组中MAP-2蛋白在三个时间段内的表达量均明显降低,差异有统计学意义(p<0.05);无镁组组内三个时间段比较,蛋白表达逐渐降低,2h与48h比较差异有统计学意义(p<0.05)。与无镁组比较,针刺血清组中MAP-2蛋白表达在各个时间段均明显增高,差异有统计学意义(p<0.05),非针刺血清组中MAP-2蛋白三个时间段的表达差异均无统计学意义;针刺血清组三个时间段组内比较,趋势差异无统计学意义(p>0.05)。与非针刺血清比较,针刺血清组MAP-2蛋白在三个时间段表达均明显增高,差异统计学意义(p<0.05)。5.Western-blot法检测GAP-43蛋白表达的情况:正常组中GAP-43蛋白在2h、12h、48h时间段的表达均较低,与正常组比较,无镁组中GAP-43蛋白表达在2h有小幅增强(p>0.05),在12h、48h表达明显降低(p<0.05);无镁组组内三个时间段比较,蛋白表达逐渐降低,2h与48h比较差异有统计学意义(p<0.05)。与无镁组比较,针刺血清组中GAP-43蛋白表达在各个时间段均明显增高,差异有统计学意义(p<0.05),非针刺血清组中GAP-43蛋白三个时间段的表达差异无统计学意义;针刺血清组三个时间段组内比较,趋势差异无统计学意义(p>0.05)。针刺血清组与非针刺血清比较,GAP-43蛋白在三个时间段表达均明显增高,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:1.针刺血清能促进无镁诱导培养新生大鼠海马神经元突起的生长发育。2.针刺血清能上调无镁诱导培养新生大鼠海马神经元内MAP-2、GAP-43蛋白的表达。3.针刺血清能促进无镁诱导培养新生大鼠海马神经元突起的生长发育与其能上调海马神经元内MAP-2、GAP-43蛋白的表达相关。