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化学药物治疗在肿瘤内科的治疗中起着举足轻重的作用。许多肿瘤治疗效果的取得主要来自包括化疗在内的综合治疗。肿瘤的发生是环境因素与宿主因素共同作用于细胞，引起细胞的增殖与癌变。增殖与癌变的细胞是多克隆的，它们基因型与表型的不一致性，常导致临床单一化疗方案的疗效不佳。积极开发新药，创新与探索新的临床化疗方案是肿瘤治疗的迫切需要。剂量强度理论的确立，使敏感肿瘤的治疗效果有所提高。但化疗的毒副作用使药物在肿瘤细胞被杀伤的同时也损伤了正常细胞，因而限制了药物用量。修饰肿瘤细胞，使其恢复或增加对化疗药物的敏感性，使药物能够更大程度上杀伤肿瘤细胞而尽量减少对正常细胞的损伤作用是提高综合治疗效果的一个重要思路。在肿瘤治疗过程中观察到：分化好，恶性程度低的肿瘤对化疗敏感性差；而分化差，恶性程度高的肿瘤有较好的化疗敏感性。原因之一是分化差的细胞分裂繁殖活跃，代谢旺盛，容易遭受细胞毒药物的损伤，最终导致细胞死亡。而分化好的细胞多处于G0期，代谢不活跃，受细郑州大学硕士研究生论文（2002）胰岛素诱导人食管癌细胞系、肝癌细胞系化疗增效及诱导凋亡的作用 胞毒药物影响较小。那么，提高肿瘤细胞的代谢水平，继之给予 化疗是否能够在一定程度上提高化疗疗效呢？基于这种考虑，本 试验拟以代谢促进剂胰岛素为诱导剂，与化疗药物联合使用，利 用体外培养的肿瘤细胞株进行试验，分别从细胞代谢，细胞周期 和诱导肿瘤细胞凋亡等方面分析研究，寻找最佳增效方式，在胰 岛素的化疗增效方面做出探索。 材料与方法： ＊)细胞株选用通过亚硝胺诱导正常人胎儿食管上度而建立的 食管癌细胞株NEC及人肝癌细胞株BELf402为试验材料。化疗药 物选用氟尿南陵（5－FU）及阿霉素（ADM）分别与限C，BEL－7402 作用。胰岛素为诱导剂。门)MTT比色分析法进行对不同加药处理” 组细胞活力及细胞代谢方面的测定。（）流式细胞仪检测不同加 药处理组的周期时相变化及凋亡情况。k)提取各试验组基因组 DNA进行琼脂糖凝胶电泳检测是否有凋亡典型梯状条带的出现。 u)电镜观察肿瘤细胞正常形态及凋亡形态。历)实验数据经 SPSS 10．0统计软件处理，采用单因素方差分析，Q检验，直线相 关分析及X‘检验，以Q刀．05为检验水准。 结 果 门)对于 5干U及 ADM设定一定范围内的浓度梯度进行 MTT 试验选用5干U及ADM对细胞生长抑制50％的浓度作为试验用药即 5＊U试验终浓度为 50．00 u g／。1，ADM试验终浓度为 6．25 u g／ml。 5－FU及叩M各浓度组与牛长率间有直线负相关性（5－FU：，。－0．897， ADM：T。－0．707，P＜0．05）。 u)在寻找胰岛素最佳诱导时间的试验中，胰岛素分别于加郑州大学硕士研究生论文（2002）胰岛素诱导人食管癌细胞系、肝癌细胞系化疗增效及诱导凋亡的作用 入化疗药物 5－FU前 24h、12h、sh、4h、oh及加入化疗药物后 4h。 sh、12h、24h力入，其抑策率分别为48．86y、48．sl％、69．81％。 65．70％、59．86y、48．81％、41．48q、48．66％、48．14y。5－FU及胰 岛素对照组抑制率分别为46．88见1．68低三次试验结果经统计， 前 sh，前 4h三次试验中与 5干U对照组相比差异有显著性 u们．01人 胰岛素对照组与空白对照组相比无统计学意义 （P＞0．05）。胰岛素诱导 ADM作用于mL－7402细胞的化疗增效作 用试验所得结果与胰岛素诱导5干U作用于NEC细胞的化疗增效作 用试验结果相符合。前4Eh加入胰岛素对细胞抑制作用最强。在 寻找胰岛素最佳诱导浓度的试验中，胰岛素与5干U联合使用，分 别设立 0．20 mu／ml、0．60 mu／ml、1．50mu／ml、5．00 mu／ml、15．、00 mu／ml、45．00 mu／ml、135．00 mu／ml、405．00 inn／ml各浓度组， 其抑策率分别为48．49％、50．95％、56．18％、65．29％、66．09％、67．09％、 66．65％、66．920。5－FU对照组抑制率为50．26q。三次试验结果经 统计，1．＊mu／1、5．00mu／l、15．OOmu／l、＊．OOmu／l。 135．00 mu／。l、405．00 mu加l各组与 5－FU对照组相 b差异有显著 性计州．01人 胰岛素诱导叩M作用于用Lf402细胞试验所得结 果与胰岛素诱导5干U作用于NEC细胞的试验结果相符合。 （3）胰岛素作用于mC细胞 4h、sh、12h、24h、48h，S期 细胞百分数分别为60．30＊、58．50y、56．30y、47．00y、46．00y， 与对照组相L有统计学意义（X‘值为2551．了89，P＝0．000）。凋亡细 胞百分数分别为0．00y、0．40y、5．10％、10．10％、10．500，与对照 组相比有统计学意义oisher精确概率法，P刀．000几胰岛素作用 于 NEC细胞 0．067 mu／ml、0．67 inn／ml、6．70 mu／ml、67．00mu／ml。 3郑州大学硕士研究生论文（2002）胰岛素诱导人食管癌细胞系、肝癌细胞系化疗增效及诱导凋亡的作用 670．00 mu?