论文部分内容阅读
研究目的：21—羟化酶缺陷症是最常见的遗传性代谢疾病，占先天性肾上腺皮质增生症的90—95％，临床分为经典型(失盐型及单纯男性化)和非经典型。21—OHD是由单基因突变导致的疾病，突变主要由CYP21基因和相邻的高度同源性假基因CYP21P之间基因重组所致。本研究目的是建立快速便捷适用于临床的基因型检测方法，以筛查CYP21已知突变，明确中国人21—OHD基因突变规律，包括对中国人非经典型21—OHD进行较系统的研究，研究基因型和临床表型的关系。中国人非经典型21—OHD的基因突变特点国内外均无报道。 对象：43例21—OHD病人，包括9例失盐型病人，26例单纯男性化病人，8例非经典型病人。另有肯定携带者(患者父母)33例，正常对照20例。 方法：(1)对43例病人和26例肯定携带者，20例正常对照从外周血提取基因组DNA，用特定引物特异性扩增CYP21成两个片断，片断1从Exon1→Exon3，片断2从Exon3→Exon10，用特定限制性内切酶消化后经琼脂糖凝胶电泳(以下均用此电泳)鉴定突变，包括P30L，E6Cluster，V281L，Q318X和R356W。用片断1为模板进行第二轮PCR；用Sau3A I消化PCR产物后电泳鉴定i2g突变。用片断2为模板进行巢式PCR；用Nde I消化PCR产物后电泳鉴定I172N突变。用基因组DNA为模板，用引物A1／A2PCR扩增，TaqI消化后电泳鉴定Del。(2)33例肯定携带者测定血清17—OHP和血清皮质醇。 结果： 1．43例病人的86条染色体中79条(91.9％)检测出突变，最常见的是I172N(36.0％)，其次为i2g(20.9％)，Del(8.6％)，其它依次为P30L(7.0％)，Q318X(7.0％)，V281L(4.7％)，R356W(2.3％)，E6Cluster(2.3％)和Exon3 Del 8bp(1.2％)。8.1％未检测出突变。 2．26例肯定携带者中最常见的突变为I172N(19.2％)，i2g(13.5％)，Del(11.5％)，其它依次为V281L和Q318X，(各3.8％)，P30L、