上皮性卵巢癌（简称EOC,Epithelial Ovarian Cancer）的早期症状不典型因而诊断困难、五年生存率低、预后普遍较差,作为全世界范围内、致死率最高的一种女性生殖系统恶性肿瘤,目前其具体的转移机制仍有待进一步探索,寻找EOC的治疗靶点,对改善患者预后和指导临床治疗意义深远。MTHFD2（全称Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2,亚甲基四氢叶酸脱氢酶）是一个存在于线粒体细胞质内的关键酶,参与细胞的一碳代谢,据既往肿瘤研究结果提示,MTHFD2可以促进多种肿瘤的恶性进程,但其在卵巢癌中的作用亟待探究。第一部分 探究MTHFD2在卵巢癌组织和细胞系中的表达情况目的:检测MTHFD2在EOC原发灶和转移灶、其他类型卵巢癌、正常卵巢上皮组织及EOC细胞系中的表达情况。方法:1.通过Oncomine、TCGA和GTEx数据库联合检测MTHFD2在卵巢浆液性囊腺癌和正常卵巢上皮的表达情况,2.通过免疫组化（IHC）的方法,检测100例卵巢组织中 MTHFD2 的表达情况;3.Real-time Quantitative PCR（RT-qPCR）和 Western Blot（WB）检测多种EOC细胞株中的MTHFD2的表达水平。结果:1.生物信息学分析结果显示:MTHFD2在EOC中的表达量高于正常卵巢上皮;2.免疫组化的结果显示MTHFD2在EOC转移灶和原发灶的表达量均明显高于正常卵巢上皮,且在转移性淋巴结中的表达量是明显高于原发部位的;3.MTHFD2广泛存在于大多数卵巢癌细胞株中。结论:MTHFD2在卵巢癌组织中具有异常的高表达水平,转移性淋巴结中的含量最高,MTHFD2在卵巢癌细胞系中也存在广泛表达,这提示MTHFD2可能参与并促进了卵巢癌的恶性行为和发展进程。第二部分 探究MTHFD2在卵巢癌细胞中的功能学作用目的:基于前期临床标本研究以及来源于生物信息学的分析结果,探究靶向MTHFD2对卵巢癌细胞恶性行为的影响,探究MTHFD2在卵巢癌细胞周期调控中的作用并进一步研究潜在调控机制。方法:1.运用siRNA介导的RNAi技术体外敲减MTHFD2的表达,通过CCK8实验、克隆形成实验、EDU检测法分别检测OVCAR8和SKOV3各组细胞的增殖、克隆形成能力;2.Transwell assay检测EOC各组细胞的迁移、侵袭能力;3.转染慢病毒载体,构建shMTHFD2和shNC稳转细胞株并验证效率,分组检测裸鼠皮下成瘤能力并绘制生长曲线;4.Annexin V-FITC/PI双染色法检测各组凋亡细胞的比例,PI染色法检测周期分布;5.WB检测G2/M周期重要调节因子:CyclinB1/Cdc2 complex、p21wafl/cip1 和 p27kip1 的表达。结果:1.MTHFD2敲减后可显著抑制OVCAR8和SKOV3细胞的增殖和克隆形成能力（p＜0.01）;2.沉默MTHFD2,细胞迁移、侵袭行为减少（p＜0.01）;3.裸鼠体内皮下成瘤实验结果表明敲减MTHFD2可以显著抑制EOC细胞株的成瘤性和生长（p＜0.01）;4.敲低MTHFD2后,细胞的凋亡比例升高,且G2/M期比例上升（p＜0.05）;5.与对照组相比,WB提示:在沉默MTHFD2的细胞中可以观察到含量下降的CyclinB1/Cdc2,p21wafl/cip1和p27kipl蛋白表达水平的升高。结论:1.敲减MTHFD2可抑制EOC细胞的增殖、克隆形成能力、迁移和侵袭能力;2.敲减MTHFD2增加细胞凋亡比率、可能通过降低CyclinB1/Cdc2.复合物的表达和活性进而诱导细胞发生G2/M周期阻滞。第三部分探究MTHFD2通过STAT3通路影响卵巢癌细胞增殖和转移目的:探究MTHFD2通过调节STAT3通路影响增殖和转移的潜在机制。方法:1.通过Western Blot检测STAT3通路中p-STAT3、STAT3和EMT通路相关蛋白Vimentin、N-cadherin的表达情况,探究MTHFD2是否通过影响STAT3通路进而调节卵巢癌细胞生物学进程;2.通过转染MTHFD2过表达质粒,检测SKOV3和OVCAR8细胞株中p-STAT3、STAT3水平变化,进一步探究MTHFD2和STAT3通路的关系。结果:1.敲减MTHFD2抑制了 STAT3通路,表现为STAT3磷酸化减少;还发现了下降的Vimentin和N-cadherin含量,表明STAT3诱导的上皮间充质转化通路也被抑制。2.过表达MTHFD2后发现STAT3磷酸化水平明显增加。结论:MTHFD2可能通过调节STAT3通路影响卵巢癌细胞生物学行为,我们的研究为揭示MTHDF2在卵巢癌中的作用机制提供了证据和线索,为探索治疗卵巢癌、改善患者预后提供了潜在的新靶点和新策略。