红花WD40基因家族分析及CtWD40-1基因克隆与功能初步研究

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WD40是真核生物中广泛存在的超基因家族,与植物生长及调控密切相关。花色苷是红花黄酮类化合物的重要组成之一,多数研究发现WD40转录因子参与调控花色苷的合成。本研究通过生物信息学方法对红花中WD40转录因子进行分析,在红花基因组中鉴定到40个CtWD40家族成员,并对其进行亚细胞定位预测、启动子顺式作用元件及蛋白互作分析;通过qRT-PCR方法揭示了红花CtWD40亚家族40个成员在红花不同组织及花期中的差异表达情况;克隆WD40家族成员中的基因CCG020780.1(CtWD40-1),并进行亚细胞定位分析及拟南芥转化,为进一步研究红花WD40基因家族的生物学功能奠定基础。具体研究结果如下:1.CtWD40转录因子家族的分子量介于22.846 kDa-170.134 kDa之间,等电点(PI)的范围是4.92-9.80,脂肪族系数的范围在51.16-93.58之间。GRAVY分析结果显示,CtWD40蛋白是一类亲水性蛋白,且多数CtWD40蛋白都不稳定。根据亚细胞定位预测结果:31个CtWD40蛋白定位在细胞核中,4个CtWD40蛋白定位在细胞质中,5个CtWD40蛋白定位在叶绿体中。2.根据基因启动子顺式作用元件搜索发现CtWD40特定启动子元件,揭示其可能参与的代谢途径。通过功能富集分析结果显示,CtWD40蛋白的功能类别多数富集到生物功能领域。在CtWD40家族蛋白中检索到10个Motif,其中6个Motif含有WD40保守结构,并通过分析CtWD40蛋白间相互作用,预测其具有潜在的调控功能。3.利用qRT-PCR技术研究了红花CtWD40亚家族40个成员在红花不同组织及花期中的差异表达情况。结果表明,所有CtWD40基因都与红花生长发育过程相关,且部分与黄酮合成过程显著相关。4.利用RT-PCR技术分离得到WD40家族成员基因CCG020780.1,并构建该基因的亚细胞定位载体pCAMBIA1302-CtWD40-1,结果表明CtWD40-1蛋白定位在细胞核中。5.成功构建CtWD40-1基因的植物超表达载体pCAMBIA3301-CtWD40-1,并通过侵染哥伦比亚型拟南芥,得到T2代转基因拟南芥。
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