目的1.研究负压伤口治疗（NPWT）后糖尿病足溃疡（DFUs）患者肉芽组织的蛋白质组学变化,进一步了解NPWT对糖尿病足溃疡愈合的影响。2.探讨组织蛋白酶S（cathepsin S,CTSS）的表达与糖尿病足溃疡（Diabetic foot ulcers,DFUs）创面愈合的关系及其作为生物学标记物诊断糖尿病足溃疡患者预后的价值。方法1.我们收集了3例因糖尿病足溃疡住院的患者。经过一周的负压伤口治疗。收集这三名患者NPWT前后的肉芽组织标本。取治疗前为NPWT前组,治疗后为和NPWT后组。然后,用无标记定量质谱法分析蛋白质表达谱,并与NPWT前比较,鉴定差异表达蛋白（DEPs）。基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）被用来解释DEP和DEP相关的信号通路。筛选出组织蛋白酶S（CTSS）、过氧化物酶2（PRDX2）、α-胰蛋白酶抑制剂重链4（ITIH4）和蛋白S1（PROS1）等差异表达蛋白。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中差异表达蛋白水平。采用westernblotting（WB）检测NPWT前后创面肉芽组织中差异表达蛋白的表达。2.2018年9月至2020年12月,安徽医科大学第一附属医院共招募39例DFU患者、54例新诊断、新治疗的2型糖尿病患者和80例健康体检者。根据受试者是否有2型糖尿病病史以及是否因DFU进行NPWT,分别设置为负压治疗前组,负压治疗后组,T2DM组和对照组。我们收集了包括受试者的测量特征、血压和早晨空腹血样在内的临床数据,通过酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）分别检测以上四组受试者血清中CTSS的表达水平。采用免疫组织化学方法观察NPWT前后DFU患者肉芽组织中组织蛋白酶S的表达。结果1.通过比较NPWT 1周前后肉芽组织样品的蛋白质谱差异,鉴定出36种具有显着差异的蛋白质（P<0.05）;这些蛋白中有33种被上调,而3种被下调。NPWT改变的蛋白质主要与抗氧化和排毒,细胞骨架,炎症反应的调节,补体和凝血级联反应以及脂质代谢有关。差异表达蛋白的功能验证表明,外周血和肉芽组织中的组织蛋白酶S（CTSS）水平显着低于NPWT之前（P<0.05）,而蛋白S1（PROS1）和α胰蛋白酶抑制剂重链H4（ITIH4）和过氧化物酶2（PRDX2）均显着高于NPWT前（P<0.05）。我们用WB和ELISA方法均证实NPWT后肉芽组织和血液中差异表达蛋白的表达情况与蛋白质谱实验结果相符。2.我们通过ELISA法对四组受试者血清中的CTSS表达情况进行了进一步的研究,结果显示:与对照组相比,T2DM组,负压治疗前组血清CTSS的表达水平均显著增高（P<0.001）。与T2DM组相比,负压治疗前组血清CTSS的表达水平显著增高（P<0.001）,与负压治疗前组相比,负压治疗后组血清CTSS的表达水平降低（P<0.05）。3.免疫组织化学结果显示,负压吸引治疗后肉芽组织中的CTSS表达降低。4.Spearman相关性分析显示CTSS的水平与空腹血糖（FBP）和总胆固醇（TCH）,白蛋白（ALB）呈正相关（FPG:r=0.3446,P<0.0001;TCH:r=0.2874,P=0.0002;ALB::r=0.2725,P=0.0004）;与高密度脂蛋白胆固醇（High density liptein cholesterol,HDL-C）呈负相关（r=-0.4759,P<0.0001）。CTSS的水平与年龄,性别,体质指数（BMI）,低密度脂蛋白（LDL-C）,收缩压（SBP）和舒张压（DBP）无显著相关。结论NPWT通过减少血栓的形成改善微循环。此外,NPWT后细胞外基质（ECM）可能增加。肉芽组织和血液中CTSS蛋白水平的降低可能是NPWT后糖尿病足创面有效愈合的潜在生物标志物。我们鉴定了多个经NPWT后的DEPs,为研究NPWT的潜在机制奠定了基础。