Caveolin-1在大鼠骨髓间质干细胞分化为神经细胞中的作用

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目的应用RNA干扰(RNA interference)技术,抑制小凹蛋白-1(Caveolin-1)基因的表达,观察小凹蛋白-1在骨髓间质干细胞(marrow mesenchymal stem cells MSCs)分化为神经细胞中的作用.方法实验分为未转染组、转染组(转染Rn-Caveolin-1-siRNA)、阳性对照组(转染Rn-MAPK-1 Control siRNA)及阴性对照组(转染Negative Control siRNA)4组。将大鼠caveolin-1siRNA(small interfering RNA),转染大鼠MSCs,采用β-巯基乙醇诱导大鼠MSCs分化为神经细胞。MTT方法检测细胞存活率,倒置荧光显微镜下观察MSCs转染后荧光表达情况;RT-PCR检测Caveolin-1和MAPK1(促分裂原活化蛋白激酶1)mRNA的表达变化;免疫细胞化学法检测Caveolin-1、神经元烯醇化酶(NSE)、神经微丝亚单位(NF-M)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化。结果1. siRNA转染72h,MSCs荧光表达最强,转染率达到(81.5±2.8)%;而且转染组MSCs的Caveolin-1 mRNA转录下降(P<0.05);MTT提示转染组细胞存活率无显著性变化(P>0.05)。2.β-巯基乙醇可以诱导MSCs向神经细胞分化,其中以转染组诱导效果最佳,NSE、NF-M的表达率显著的高于其它各组(P<0.01)。3.随诱导时间延长,各组Caveolin-1表达持续增加,诱导6d达到峰值,与诱导前、诱导6h相比有显著性差异(P<0.05)。此外,转染组与其他各组同时间点的Caveolin-1表达均显著降低(P<0.01)。结论Caveolin-1siRNA可以抑制Caveolin-1基因的表达,提高MSCs向神经细胞的分化效率,以上结果提示Caveolin-1有可能参与了MSCs的横向分化过程.以Caveolin-1为标记蛋白的脂筏在MSCs诱导分化为神经细胞中可能起到重要的调控作用。
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