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目的:弗朗西斯菌(Francisella)是一类兼性的细胞内寄生菌,部分菌种致病能力强,宿主众多,传播途径多样,社会危害重大。课题组前期在临床和环境中分离和发现了广州弗朗西斯菌(Francisella guangzhouesis)新种、另弗朗西斯菌(Allofrancisella)新属、嗜半胱氨酸菌(Cysteinphilum)新属、以及多个未命名的新种和新属新种。本研究拟在前期研究的基础上,利用多相分类学方法,进一步对前期分离的蜃楼弗朗西斯菌样新菌种进行系统分类研究,同时利用已分离鉴定的蜃楼弗朗西斯菌,建立MALDI-TOF质谱超级图谱数据库,深入研究蜃楼弗朗西斯菌样新种,挖掘潜在新种。方法:运用培养,革兰染色,透射电子显微镜等传统和现代表型鉴定方法;运用氧化酶,触酶,吲哚,API ZYM,API 20NE,Vitek 2 GN鉴定卡、NH鉴定卡,全细胞脂肪酸测定,E-text药敏测定等生理生化鉴定及药敏检测方法;运用16S rRNA基因序列测定分析技术,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)检测技术,基于全基因组直系同源平均核苷酸一致率(Orthologous Average Nucleotide Identity,OrthoANI)分析等方法,对选取前期分离的蜃楼弗朗西斯菌样菌株SYW-1、SYW-3、SYW-9,进行多相分类学研究。利用前期分离并鉴定的蜃楼弗朗西斯菌QH-2,QH-3,QH-4,QH-5,QH-12,QH-15,1958,ZhangZhou,YJ-2,标准菌株 ATCC 25015,构建蜃楼弗朗西斯菌MALDI-TOF MS超级图谱数据库,并用广州另弗朗西斯菌NCTC 13053等近缘菌株进行验证。结果:实验菌株SYW-1、SYW-3、SYW-9,均为需氧菌,营养要求苛刻,在含有L-半胱氨酸的BCYE a培养基中,48小时形成1mm大小灰白色、表面光滑、圆形凸起、边缘整齐、半透明、湿润的菌落。革兰染色阴性,细沙状散在分布球杆菌。大小约为1.0~1.2 X1.2~1.5μm。生化及酶谱反应均不活泼,只有γ-谷氨酰转移酶、L-脯氨酸芳胺酶、鸟氨酸脱羧酶、亮氨酸转氨酶、苯丙氨酸芳胺酶、L-谷氨酰胺等寥寥几个试验存在反应性。与标准菌株ATCC 25015比较,某些细胞脂肪酸缺失或含量较少。对氯霉素、多西环素、左氧氟沙星、四环素、庆大霉素、环丙沙星体外活性均表现为敏感。根据16S rRNA基因分析显示,试验菌株分类学地位均归属于弗朗西斯菌属内,其亲缘关系与蜃楼弗朗西斯菌和船城弗朗西斯菌最为密切;基于全基因组直系同源平均核苷酸一致率,试验菌株G+C含量为31.4%~32.9%,与弗朗西斯菌属内菌种比对OrthoANI值均<95%。蜃楼弗朗西斯菌MALDI-TOF MS超级图谱数据库初步构建成功。结论:前期分离的蜃楼弗朗西斯菌样菌株,从分子水平上确定其分类地位归于弗朗西斯菌属,与蜃楼弗朗西斯菌、船城弗朗西斯菌亲缘关系密切,但OrthoANI比值不支持他们归在两者中的任何一个,按照国际原核生物委员会最新的菌种鉴定要求,初步判断蜃楼弗朗西斯菌样试验菌株SYW-1、SYW-3、SYW-9均为弗朗西斯菌属下的新种。