【摘 要】
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目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤,导致肿瘤死亡的第二大原因。结直肠癌侵袭和转移的发生是导致生存率低、死亡率高的主要原因。结直肠癌侵袭和转移的发生原因和机制目前还不是很清楚,所以研究引起结直肠癌发生侵袭转移的分子标志物显的尤为重要。神经前体细胞表达下调蛋白9(NEDD9,又称为HEF1和Cas-L),是一种多结构域的骨架蛋白,在黑色素瘤、肝癌、肺癌和乳腺癌多种肿瘤中呈高表达。本实验研究的目的是通过探究
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目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤,导致肿瘤死亡的第二大原因。结直肠癌侵袭和转移的发生是导致生存率低、死亡率高的主要原因。结直肠癌侵袭和转移的发生原因和机制目前还不是很清楚,所以研究引起结直肠癌发生侵袭转移的分子标志物显的尤为重要。神经前体细胞表达下调蛋白9(NEDD9,又称为HEF1和Cas-L),是一种多结构域的骨架蛋白,在黑色素瘤、肝癌、肺癌和乳腺癌多种肿瘤中呈高表达。本实验研究的目的是通过探究NEDD9在结直肠癌组织以及细胞中的表达,以及NEDD9通过应激活化蛋白激酶(JNK,c-Jun氨基末端激酶)/上皮细胞间充质转化(EMT)信号通路对结直肠癌侵袭和转移的影响。在探索结直肠癌发病机制的同时,为其诊断及肿瘤药物治疗提供靶点。方法:实验利用定量PCR技术检测在40例结直肠癌组织、癌旁组织的临床标本中和正常的结直肠细胞FHC、结直肠癌细胞HCT-116中NEDD9的表达量。实验分为LvNC和Lv-NEDD9两组,用空载慢病毒转染结直肠癌的HCT-116细胞为Lv-NC组,NEDD9下调的慢病毒转染HCT-116细胞为Lv-NEDD9组。用定量PCR检测两组中NEDD9、EMT相关标志性蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达量。利用Transwell侵袭实验检测两组细胞的侵袭能力,利用Transwell迁移实验和划痕迁移实验检测两组细胞的迁移能力。利用CCK-8实验检测两组细胞的增殖能力。利用Western Blot实验检测NEDD9、JNK、E-cadherin和Vimentin蛋白在两组细胞的表达量。加入JNK阻断剂后实验分为DMSO和SP600125两组,在HCT-116细胞中加入DMSO为DMSO组,在HCT-116细胞中加入SP600125为SP600125组。利用Transwell侵袭实验检测两组细胞的侵袭能力,利用Transwell迁移实验和划痕迁移实验检测两组细胞的迁移能力。利用CCK-8实验检测两组细胞的增殖能力。利用Western Blot实验检测JNK、E-cadherin和Vimentin蛋白在两组细胞的表达量。结果:定量PCR结果显示:与癌旁组织比,NEDD9在结直肠癌组织中呈高表达,有统计学意义(P<0.01);与正常结直肠细胞比,NEDD9在结直肠癌细胞中呈高表达有统计学意义(P<0.01);与Lv-NC组比,NEDD9在Lv-NEDD9组中被成功下调,Vimentin的表达量降低,E-cadherin的表达量升高,有统计学意义(P<0.01)。Transwell实验结果显示:与Lv-NC组比,Lv-NEDD9组的迁移(P<0.05)和侵袭(P<0.01)能力减弱;与DMSO组比,SP600125组的迁移和侵袭能力减弱,有统计学意义(P<0.01)。划痕实验结果显示:与Lv-NC组比,Lv-NEDD9组的迁移能力减弱(P<0.01);与DMSO组比,SP600125组的迁移能力减弱(P<0.01)。Western Blot结果显示:与Lv-NC组比,Lv-NEDD9组的NEDD9、JNK、Vimentin表达量减少(P<0.05),E-cadherin表达量增加(P<0.01);与DMSO组比,SP600125组JNK、Vimentin表达量减少(P<0.01),E-cadherin表达量增加(P<0.05)。结论:NEDD9在结直肠癌组织和细胞中呈高表达,并且NEDD9可以通过JNK/EMT信号通路促进结直肠癌的侵袭和迁移能力。
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