【摘 要】
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目的:探究miR-519d-5p对乳腺癌化疗药物敏感性的影响及可能的作用机制。方法:（1）实时荧光定量PCR检测miR-519d-5p在癌旁组织和癌组织,正常乳腺细胞和多株乳腺癌细胞中的差异表达;（2）四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测miR-519d-5p对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响;（3）生物信息学数据库预测并用双荧光素酶报告基因实验验证RELA是miR-519d-5p的靶基因;（4）Wester
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目的:探究miR-519d-5p对乳腺癌化疗药物敏感性的影响及可能的作用机制。方法:（1）实时荧光定量PCR检测miR-519d-5p在癌旁组织和癌组织,正常乳腺细胞和多株乳腺癌细胞中的差异表达;（2）四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测miR-519d-5p对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响;（3）生物信息学数据库预测并用双荧光素酶报告基因实验验证RELA是miR-519d-5p的靶基因;（4）Western Blotting和实时荧光定量PCR检测RELA在正常乳腺细胞和多株乳腺癌细胞中的差异表达;（5）实时荧光定量PCR和Western Blotting检测miR-519d-5p对RELA转录水平和转录后水平的影响;（6）JASPAR数据库预测并用染色质免疫共沉淀和DNA pull down实验验证RELA可与miR-519d-5p的启动子结合;（7）实时荧光定量PCR检测RELA对miR-519d-5p转录水平的影响;（8）划痕伤愈实验检测miR-519d-5p或/和RELA对乳腺癌细胞迁移的影响;（9）MCF-7细胞移植瘤裸鼠模型检测miR-519d-5p在体内对乳腺癌细胞增殖和药物敏感性的影响。结果:（1）相对于乳腺癌旁组织和正常乳腺细胞,miR-519d-5p在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中显著低表达,且表达量与RELA呈负相关;（2）miR-519d-5p在体外水平影响乳腺癌细胞对化疗的敏感性;（3）生物信息学数据库和双荧光素酶报告基因实验结果表明RELA是miR-519d-5p的靶基因;（4）实时荧光定量PCR和Western Blotting结果显示miR-519d-5p负向调控RELA的转录和翻译水平;（5）JASPAR数据库预测并用染色质免疫共沉淀和DNA pull down实验表明RELA可与miR-519d-5p的启动子结合;（6）实时荧光定量PCR结果显示RELA负向调控miR-519d-5p的转录水平;（7）划痕伤愈实验结果显示miR-519d-5p与RELA形成负反馈环路调控乳腺癌细胞的迁移;（8）miR-519d-5p能在体内水平影响乳腺癌细胞的增殖和对阿霉素的敏感性。结论:miR-519d-5p通过与RELA形成负反馈环路,在调节对化疗药物的敏感性方面起着关键作用。这些发现为miR-519d-5p与化疗药联合使用以克服化疗耐药提供了新的治疗策略。
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