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目的:本研究旨在探讨FHL2通过β-catenin信号通路调控肾间质纤维化的分子机制。方法:1.应用Western Blot和间接免疫荧光技术观察转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)后细胞内FHL2的表达情况。2.转染FHL2质粒或小分子干扰RNA(Small interfering RNA,SiRNA)分别上调或下调NRK-49F细胞内FHL2蛋白表达,应用Western Blot及免疫荧光技术观察纤维化相关蛋白表达情况。3.采用质核分离技术分离细胞质及细胞核成分,观察NRK-49F细胞在FHL2蛋白表达上调后β-catenin的活化情况。以TGF-β1刺激NRK-49F细胞后应用免疫共沉淀、Western Blot观察两者的相互作用。应用TOP Flash技术观察NRK-49F细胞内FHL2对β-catenin转录的调控。4.采用结扎雄性CD-1小鼠左侧输尿管的方法建立单侧输尿管梗阻(Unilateral ureteral obstruction UUO)动物模型,并设假手术组小鼠为对照组,术后14天处死小鼠并留取手术侧和对侧肾组织标本,应用Western Blot及免疫组化技术观察正常及梗阻性损伤后小鼠肾脏中FHL2的表达。5.将肾间成纤维细胞FHL2基因特异性敲除小鼠和对照组小鼠采用上述模型,应用Western Blot及免疫荧光技术比较梗阻性损伤后的严重程度。结果:1.TGF-β 1刺激后NRK-49F细胞中FHL2蛋白水明显升高,并且呈现剂量及时间依赖性,间接免疫荧光结果与Western一致。2.NRK-49F细胞内FHL2过表达能够增加α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)、I型胶原蛋白(Collagen I)的表达;下调FHL2表达能够抑制α-SMA、FN及CollagenI的表达。通过qPCR和间接免疫荧光也能观察到一致的结果。3.NRK-49F细胞在FHL2蛋白表达上调后通过质核分离技术观察到细胞核中β-catenin的活化明显增加,免疫共沉淀及TOP-Flash结果都表明FHL2能够增加β-catenin的活化。4.梗阻性肾病纤维化肾组织中FHL2蛋白水平表达明显增加,呈现时间依赖性。免疫组化显示UU014d后肾组织中FHL2蛋白水平表达明显增加。5.肾间质成纤维细胞FHL2基因特异性敲除小鼠与对照组小鼠在假手术组中,基因敲除组的肾脏组织形态与对照组相当,而在UUO模型中,基因敲除组的肾小管萎缩和间质纤维相较于对照组都有明显改善,基因敲除组间质纤维化面积及总胶原含量都明显减少。同时,在基因敲除小鼠UUO组中,FN、α-SMA和I型胶原明显减少。