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目的:通过对肿瘤标志物AKT、GSK-3β、Snail在肾母细胞瘤组织中的免疫组化研究及STAT3对肾母细胞瘤肿瘤干细胞增殖,凋亡作用的研究,探讨AKT、GSK-3β及Snail与肾母细胞瘤分级,预后等各临床指征间的相关性,以及STAT3抑制后对肾母细胞瘤G401细胞株肿瘤干细胞增殖、凋亡等的影响作用,旨在为肾母细胞瘤肿瘤治疗的基础研究提供一定的理论依据及实验基础。方法:本研究分为三部分。第一部分通过对肾母细胞瘤组织切片进行AKT、GSK-3β、Snail免疫组化染色,分析三种肿瘤标志物与肾母细胞瘤各临床指征间的相关性;第二部分通过免疫磁珠分选法自肾母细胞瘤G401细胞株中分选并获得CD133+细胞群,并通过细胞球形成实验,平板克隆实验,划痕实验,RT-PCR实验及裸鼠体内成瘤实验证明CD133+细胞具有肿瘤干细胞性质;第三部分使用STAT3抑制剂Stattic作用于G401细胞株中的CD133+细胞,MTT法检测在不同给药浓度(0μM,0.625μM,1.25μM,2.5μM,5μM)Stattic作用下对CD133+细胞增殖抑制作用,Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染检测Stattic对CD133+细胞凋亡的影响,裸鼠体内实验检测Stattic对CD133+细胞所成瘤体的抑制作用。WesternBlot实验检测Stattic对CD133+细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bcl-xl的影响。结果:1.AKT、GSK-3β、Snail在肾母细胞瘤组织中免疫组化染色结果:AKT的表达水平与肾母细胞瘤的临床分期和转移两指标间具有显著相关性(p=0.029,p=0.005);而Snail的表达水平则与肾母细胞瘤的临床分期,转移及复发三指标间具有显著相关性(p=0.007,p=0.001,p=0.042),然而,GSK-3β与肾母细胞瘤各临床指征间并无显著相关(p>0.05);Akt与Snail的表达水平间具有相关性(p=0.039),而Akt与Snail均与GSK-3β的表达无显著相关(p>0.05);AKT、Snail表达水平高的肾母细胞瘤患儿,其无病生存期(Disease Free Survival,DFS)、总生存期(Overall Survival,OS)显著降低(p<0.05);而GSK-3β与肾母细胞瘤患儿的无病生存期及总生存期间并无显著相关(p>0.05)。2.免疫磁珠分选结果:分选前经流式细胞仪检测G401细胞株中CD133+细胞比例为7.38%,经免疫磁珠分选后检测分选所得细胞中CD133+细胞的表达水平,结果显示,其中CD133+肾母细胞瘤细胞的比例高达99.97%。3.细胞球形成实验结果:CD133+肿瘤细胞较CD133-细胞及亲代肿瘤细胞具有更强的细胞球形成能力(p<0.05)。4.平板克隆形成实验结果:CD133+细胞组形成的克隆数目显著高于CD133-细胞组及亲代细胞组(p<0.05)。5.划痕实验结果:CD133+细胞较CD133-细胞具有更强的迁移能力。6.RT-PCR实验结果:CD133+细胞中肿瘤干细胞相关基因SOX、NANOG、OCT4的表达水平均较CD133-组及亲代细胞组更高(p<0.05)。7.裸鼠体内成瘤实验结果:注射CD133+细胞组裸鼠的肿瘤形成率及肿瘤大小均高于注射CD133-细胞组裸鼠。8.MTT法检测结果:肾母细胞瘤CD133+细胞的存活率随着Stattic药物浓度(0-5μM)的逐渐增加,其存活率逐渐降低。在0.625μM和1.25μM的Stattic药物浓度下,其对细胞的抑制率分别为25%及46%。9.Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染检测结果:经Stattic处理后,CD133+细胞凋亡水平明显升高,且与Stattic存在浓度依赖性,随着Stattic浓度的增加,CD133+细胞的凋亡数目增高。10.裸鼠体内实验结果:通过腹腔给药,Stattic能够有效抑制CD133+细胞所成瘤体的生长,给药第四周,CD133+/Stattic组裸鼠所成瘤体的体积显著小于CD133+对照组(p<0.05)。瘤体的HE染色结果显示CD133+/Stattic组较对照组发生明显的细胞凋亡现象,包括染色质浓缩,核固缩,细胞结构消失等。而对照组细胞核深染,核分裂象较多,表明细胞仍在较为活跃的增殖状态。11.WesternBlot实验结果:经Stattic处理后p-STAT3的表达明显降低,而经Stattic处理后凋亡相关蛋白Bcl-2,Bcl-xl的蛋白表达水平也随之下降。结论:1.AKT的表达水平与肾母细胞瘤患儿的临床分期和转移两指标间具有显著相关性;而Snail的表达水平则与肾母细胞瘤的临床分期,转移及复发三指标间具有显著相关性;AKT与Snail的表达水平与肾母细胞瘤患儿的不良预后具有显著相关。而GSK-3β的表达水平则与肾母细胞瘤各临床指征间无显著相关。2.肾母细胞瘤中CD133+细胞具有肿瘤干细胞性质,提示着CD133可能为肾母细胞瘤的肿瘤干细胞标志物。3.通过靶向抑制其中的STAT3,可有效抑制肾母细胞瘤CD133+细胞的生长,加速其凋亡。