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目的:研究新生期应激对脑内胶质淋巴系统的影响及其分子机制。方法:1、应激模型构建:采用C57BL/6小鼠新生期母爱剥夺(NMD)模型,小鼠从出生第2天至第15天,每天与母鼠分离3小时,连续应激14天。2、模型评价:测定小鼠成年后(6周)体重变化、血浆皮质酮浓度、内脏痛敏(结直肠扩张实验)和抑郁症状(悬尾实验、强迫游泳实验和旷场实验)。3、胶质淋巴系统功能测定:(1)荧光成像法:小脑延髓池注射荧光示踪剂,在30 min和90 min时灌流固定,振动切片,在荧光显微镜下拍照,分析示踪剂在脑内的分布。(2)荧光酶标仪法:小脑延髓池注射荧光示踪剂,30 min和90 min时取左脑海马、左脑皮层和右脑,匀浆离心后取上清,酶标仪检测荧光示踪剂含量。(3)核磁共振成像法(MRI):小脑延髓池注射造影剂Gd-DPTA,在20 min、40min以及60 min扫描成像,观察分析造影剂的分布。4、Western blot和RT-q PCR检测小鼠海马、前部皮层中AQP4、PDGF-B、PDGFRb蛋白表达和转录水平变化;RT-q PCR测定小鼠海马、前部皮层中AQP4相关锚蛋白Agrin、Laminin、α-syntrophin以及Dystrophin的转录水平变化。5、免疫荧光法测定小鼠海马、前部皮层AQP4在血管周隙的分布情况,以及周细胞标记物PDGFRb的表达。结果:1、与CON组相比,NMD组小鼠6周龄时体重变化无差异(P>0.05),但其血浆皮质酮浓度显著升高(P<0.05)。行为学结果显示,NMD组小鼠6周龄时在悬尾实验和强迫游泳实验中静止时间显著增加,相对于CON组(P<0.05);在旷场实验中,NMD组小鼠在旷场箱中运动的总距离显著降低(P<0.05),在中央格停留时间显著减少(P<0.01);且在6周龄时,NMD组小鼠出现内脏痛敏(P<0.01),一直持续到第13周。2、荧光成像法显示:与CON组相比,在四个切片部位(Bregma+2.5,+1.1,0,-1.1 mm),NMD组小鼠6周龄时FITC-d3在注射后30 min时进入脑内的量明显减少(P<0.05),而在90 min时,在这四个切片部位,示踪剂在脑内的残留量显著增加(P<0.05)。荧光酶标仪法结果表明:在注射FITC-d3后30 min,NMD组小鼠左脑海马、左脑皮层以及右脑的荧光示踪剂含量均显著降低(P<0.05);而在90 min时,NMD组小鼠左脑海马、左脑皮层以及右脑的荧光示踪剂残余量均显著增加(P<0.05)。磁共振成像法结果显示:与CON组相比,NMD组小鼠在注射造影剂60 min后,在三个矢状面位置(Lateral 0,Lateral 0.6,Lateral 1.5)进入造影剂的强度显著降低(P<0.05)。3、与CON组小鼠相比,NMD组小鼠6周龄时海马、前部皮层AQP4蛋白转录及表达水平不变(P>0.05),但小鼠海马、前部皮层中AQP4失去极性分布;聚集蛋白(Agrin)和肌营养不良蛋白(Dystrophin)在NMD组小鼠海马、前部皮层中转录水平显著降低(P<0.05)。4、与CON组小鼠相比,NMD组小鼠6周龄时海马及前部皮层中PDGF-B转录及表达水平显著降低(P<0.05),周细胞表达PDGFRb显著减少(P<0.05)。5、NMD小鼠应激结束后(16天龄),海马及前部皮层AQP4表达不变(P>0.05),海马中Agrin和Dystrophin转录水平显著降低(P<0.05),前部皮层中Agrin、Dystrophin以及Laminin转录水平显著降低(P<0.05)。另外,海马以及前部皮层中PDGF-B转录及表达水平显著降低(P<0.05),PDGFRb分子表达水平显著降低(P<0.05)。结论:新生期应激导致海马以及前部皮层AQP4分布异常从而损害了脑内胶质淋巴系统功能,其机制与PDGF-B的表达降低以及周细胞的减少有关。