1．1 中文摘要：O~6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶基因多态性与食管癌高易感性关系研究 食管癌(Esophageal Carcinoma，EC)是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一，显著的地域性分布差异是食管癌突出的流行病学特征，高、低发区发病率可相差500倍。在世界范围内，存在从土耳其东部开始，经伊拉克、伊朗、中亚，一直延伸到中国北部的一个食管癌高发地带。我国一般地区男性发病率为31.66／10万，女性发病率为15.93／10万，平均男、女性比率为2：1。河南省林州市和毗邻的安阳等地，是我国，也是世界上食管癌发病率和死亡率最高的地区。男、女性年平均食管癌发病率分别为161／10万和103／10万，局部地区可高达500／10万，平均男女比例为1.5：1。而与此地区相隔不到200公里，食管癌死亡率就从林县地区最高的500／10万人口下降到了26／10万人口，这一特殊的发病模式引出许多重要的学术问题：决定食管癌高易感性的分子基础是什么?环境因素与易感个体之间的分子学联系是什么? 尽管食管癌的确切发病因素尚不十分清楚，但河南省食管癌高发区人群研究已提示：环境中的致癌因素，如亚硝酸胺、霉菌毒素和因膳食结构单调而引起的某些营养元素的缺乏，是食管癌发生的主要危险因素。近年来，分子生物学研究进一步提示DNA损伤修复酶的异常改变(多态变体)可能是决定食管癌高易感性的重要分子基础。因此探索DNA损伤修复酶基因多态性与食管癌高易感性之间的关系，对食管癌早期预防、诊断及基因治疗具有重大理论意义和应用价值。 O~6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(O~6-alkylguanine-DNA alkyltransferase，AGT)是DNA中O~6-烷基鸟嘌呤的主要修复蛋白，O~6-烷基鸟嘌呤是由环境中或药物中的烷基化化学物质诱导产生的一种重要的前突变病变。外界环境中的致癌物和致突变物(包括N-亚硝基化合物)，许多属于烷基化合物，O~6-烷基鸟嘌呤是由烷基化学物诱导产生的重要的DNA突变前损伤产物，如果未能及时修复，在进行DNA复制时，O~6-烷基鸟嘌呤则倾向于同胸腺嘧啶配对，而不同胞嘧啶配对，并导致碱基对GC转换为AT。DNA中O~6-烷基鸟嘌呤的形成和存在对突变发生、郑州大学医学院癌症研究室2004届硕士研究生毕业论文肿瘤形成及氯乙基亚硝基脉等化疗药物诱导的细胞毒作用均有重要影响。 AGT在保护细胞免受烷基化试剂诱导的突变和细胞毒侵袭等方面起着关键作用。现己观察到不同个体间AGT活性有一定差异，这种差异源于甲基鸟嚓吟甲基转移酶基因的多态性。AGT在哺乳类动物中是由MGMT基因编码，而在细菌则是由ada和ogt基因编码。人类MGMT基因定位于10q26，被l一Kilobase mRNA编码，其抵抗细胞毒的作用主要取决于肤链145位上的半肤氨酸位点。全长约为170kb，含有5个外显子和4个内含子。它是含有207个氨基酸的单链，分子质量为20一25ku。DNA修复蛋白06一烷基鸟嚓吟一DNA烷基转移酶(AGT)能特异性地修复DNA中的06一烷基鸟嘿吟加成物，其修复方式是将加成物从DNA转移至其活性位置的半胧氨酸残基上(位于AGT的145密码子)，此转移属化学反应，且无活性位置的再生和AGT的分解。AGT在保护细胞免受烷基化试剂所致的突变和癌变方面起着关键作用，由N一烷基一N一亚硝基脉诱导的啮齿动物的肿瘤发生与靶细胞和靶器官中06一烷基鸟嗓吟修复障碍和修复不足有关。在培养的啮齿动物细胞中，经乙亚硝基脉处理后，AGT活性较低的细胞较AGT活性较高的细胞发生转化的频率更高。过度表达AGT的转基因鼠可免患烷基致癌剂诱导的肿瘤，无AGT活性的小鼠对甲基亚硝基脉的致癌效应尤其敏感。AGT亦可影响肿瘤细胞对烷基化疗药物的敏感性，尤其是对诸如卡氮介等氯乙基制剂的敏感性。现已观察到AGT表达与机体对甲基化疗药物、盐酸甲基节脱和temozolomide的抗药性有直接联系。作者的假设是:在河南安阳食管癌高发区人群普遍亚硝胺类化合物高水平的状况下，AGT基因多态所造成的DNA损伤修复障碍将会影响机体患ESCC危险性，并是造成该地区ESCC高易感性的遗传学基础之一。我们通过对该地区人群进行回顾性“病例一对照”研究，从而探讨AGT基因多态性与食管癌高易感性之间的关系，以验证我们的假设，并为高危人群的筛选和防治提供有意义的信息和手段。材料和方法: 实验包括275例ESCC患者，所有病例均来自安阳地区，于2000年至2004年间在安阳肿瘤医院病理确诊，并且排除有其它恶性肿瘤病史者;3巧例与病例组年龄性别相匹配的正常对照随机选自该地区志愿参与内镜普查的人群，所有入06一烷基鸟嗓吟~1)NA烷基转移酶基因多态性与食管癌高易感性研究选者均经详细问卷调查，以查明其疾病史并排除有肿瘤病史者。采用美国Gentra公司的试剂盒以盐析法从血凝块残留液中提取基因组DNA，采用PCR法、基于PCR基础上的限制性片段多态检测法(PCR一RFLP)及单链构象多态性分析检测法(PCR一SSCP)对各基因型进行检验和区分。采用回顾性“病例一对照”试验设计，所得的对照组数据用Fishe:Exact xZ检验验证其各基因型分布是否符合Hardy一weinberg平衡，采用非条件性logistic回归模型对年龄、性别进行校正后计算比数比(Odds Ra