近年来随着人们对中草药的认识越来越多,枸杞子因作为膳食补充剂而被广泛关注。药理活性研究发现,枸杞子在神经保护、抗衰老、免疫调节、保肝、抗氧化、明目和抗肿瘤等方面具有显著疗效。暨南大学课题组前期研究发现,枸杞子二咖啡酰亚精胺类衍生物能够改善果蝇AD模型的短期记忆能力,然而其机制尚不清楚。胆固醇-24-羟化酶（CYP46A1）是大脑中胆固醇代谢的关键酶,胆固醇经CYP46A1代谢生成24S-羟基-胆固醇进而排出脑外。已有研究表明24S-羟基-胆固醇水平过高可能与神经退行性疾病如阿尔茨海默病等密切相关。由此我们推测,枸杞子亚精胺类化合物有可能通过抑制CYP46A1活性降低24S-羟基-胆固醇水平,降低24S-羟基胆固醇的神经毒性。本研究旨在探索枸杞子中亚精胺类化合物是否具有CYP46A1抑制潜能。鉴于目前对于CYP46A1代谢活性水平的研究鲜少,缺乏快速高效的体外检测CYP46A1活性的方法,本研究首先建立了一种快速检测CYP46A1活性的UPLC-MS/MS方法,并应用于CYP46A1酶动力学研究,以及SD大鼠、昆明小鼠及人源CYP46A1代谢性质的种属差异研究。经方法学验证分析,24S-羟基-胆固醇标准曲线的线性拟合良好R²=0.9983,日间、日内精密度、准确性、稳定性均符合生物样品的分析要求,其最低定量限在ng/mL水平。在体外酶动力学研究中,人重组的酶CYP46A1催化胆固醇代谢生成产物24S-羟基-胆固醇的反应符合Michaelis-Menten动力学,常数K_m为3.30±0.48μmol/L,V_max为0.29±0.01 nmol/min/nmol CYP。利用SD大鼠、昆明小鼠及人的种属研究发现,昆明小鼠主要代谢产物是24,25和24,27-双羟基-胆固醇,而SD大鼠和人CYP46A1的主要代谢产物为24S-羟基-胆固醇。利用已建立的CYP46A1活性检测方法和重组人源CYP46A1,我们对枸杞子中七种亚精胺类活性化合物（DW-1至7）对CYP46A1的抑制能力进行了体外评价。发现DW-1、DW-2和DW-3均能强烈地抑制CYP46A1介导的胆固醇24-羟基化反应,酶动力学研究表明DW-1和DW-2对CYP46A1的抑制类型均为混合性抑制,K_i分别为106.30±24.36nmol/L和为258.40±171.70 nmol/L,然而DW-3的抑制类型为竞争性抑制,K_i为12.89±1.64 nmol/L。结果提示,即使人体摄入低剂量的DW-1、DW-2和DW-3也有可能在人体内通过抑制CYP46A1活性而导致24S-羟基-胆固醇含量降低,进而降低其对神经细胞尤其是神经元细胞的毒性作用。本研究为CYP46A1抑制剂的开发以及揭示枸杞子神经保护作用的机制提供了新思路和实验依据。