目的:探讨口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)相关的成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)糖代谢特征以及关键调控分子研究。方法:(1)用组织块培养法获得原代CAFs后,再通过机械刮除法和胰酶消化法纯化细胞,并通过形态学观察和蛋白表达检测后,对所得细胞进行初步鉴定。(2)用CCK8、流式细胞术和Seahorse细胞代谢仪分别对比研究CAFs与正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)的生长增殖、凋亡及糖代谢特征。(3)非标记定量蛋白组学(Label-free)研究CAFs/NFs的线粒体的差异蛋白,利用Gene Ontology、KEGG数据库对差异蛋白进行分析、筛选CAFs糖代谢调控关键蛋白。(4)通过慢病毒转染CAFs过表达筛选的关键蛋白,并进行其代谢调控功能进行验证。结果:(1)成功分离、培养和鉴定CAFs,光学显微镜下,CAFs、NFs形态有差异,细胞免疫组织化学显示:CAFs、NFs均阳性表达波形蛋白(Vimentin),阴性表达细胞角蛋白(Cytokeratin,CK);而CAFs较NFs明显高表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。(2)CCK8和流式细胞术结果显示,与NFs相比,CAFs增殖活性明显增强,而凋亡率明显下降,且差异均具有统计学意义(P<0.0001)。(3)Seahorse细胞代谢仪检测结果提示,与NFs相比,CAFs线粒体活性更强,且以氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OXPHOS)代谢为主,能产生更多的ATP。且CAFs高表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子 1(Peroxisome proliferator-activated receptor γcoactivator-1 α,PGC-1α),和线粒体转录因子 A(transcription factor A mitochondrial,TFAM)。(4)成功对CAFs和NFs线粒体进行分离、纯化和鉴定,通过电镜对其超微结构进行观察。Label-free定量蛋白组学检测结果显示,CAFs和NFs的线粒体中鉴定出差异表达蛋白183个,95个蛋白上调,88个蛋白下调。Gene Ontology、KEGG对差异蛋白功能分析结果显示,26个蛋白与OXPHOS密切相关,其中粒体膜ATP合酶(ATP50)的表达水平明显升高,差异倍数为3.84(FC=3.84,FC:fold change),而肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)的表达水平则明显降低,FC=2.00。(5)慢病毒转染CAFs过表达TRAP1,其OXPHOS代谢能力较未转染组和空载组明显降低。结论:(1)CAFs线粒体功能强大,且以氧化磷酸化代谢为主,可促进肿瘤的生长和进展。(2)TRAP1是CAFs糖代谢的重要调控分子之一。对其调控机制的进一步深入研究,对阐明口腔CAFs糖代谢在OSCC中的作用以及发现OSCC新的治疗靶标具有重要的理论意义和应用价值。