GLUT4转运的分子机制研究和质膜蛋白质的标记

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:maiapink
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葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)是一类在肌肉细胞和脂肪细胞中高表达的跨膜蛋白。静息状态下,储存GLUT4的囊泡主要在细胞内,细胞膜上的GLUT4分子很少。胰岛素刺激后,GLUT4转运靠近细胞质膜,与细胞膜发生融合,从而增加细胞膜上的GLUT4的数目。胰岛素刺激下GLUT4不能正常上膜一直被认为与胰岛素耐受和二型糖尿病相关。胰岛素刺激的GLUT4转运的完成需要胰岛素信号的传递和GLUT4在细胞内的转运两个步骤。AS160和Rab10在这两个步骤中起着关键的过渡作用。但是Rab10是怎样调控GLUT4上膜是不清楚的。我们通过confocal,TIRFM,Co-IP,FRET等方法发现Myosin-Va和GDIs(GDPdissociationinhibitor)通过与Rab10作用参与了胰岛素刺激的GLUT4转运过程。   我们发展了一种快速标记细胞质膜表面蛋白的方法。在雷帕霉素的介导下,纯化的FKBP融合的荧光蛋白可以快速和特异地结合到细胞表面,只需要9秒就可以结合50%的目的蛋白。这种快速标记的特性,使得我们可以方便观测质膜蛋白的转运上膜和内吞。通过追踪实验,我们可以快速标记高糖高钾刺激后新上膜的VAMP2分子,并且发现内吞的VAMP2在细胞内与网格蛋白依赖的内吞途径标志物转铁蛋白共定位。我们还研究了hTac的内吞,它可能是以巨胞饮的方式进入细胞。
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