口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease,FMD）是一种由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）引起的动物烈性传染病。口蹄疫主要感染偶蹄类动物,从感染到发病时间短,可以引起体温剧烈升高并且高度传染,危害性极大。口蹄疫病毒是人类发现的第一个动物病毒,也是人类发现的最小的动物病毒。根据其血清型可以将口蹄疫病毒分为O、A、C、Asia 1（亚洲I型）、SAT 1（南非1）、SAT 2（南非2）、SAT 3（南非3）型,其中每个血清型又包含多个亚型且各个亚型之间不存在交叉反应。我国的主要流行血清型为O型、A型和Asia 1型,其中以O型影响最为广泛,该病的流行和爆发给当地的畜牧业经济带来了巨大的影响。为控制该病的流行,预防该病的爆发,研制出一种高效、简便、快捷的新型疫苗已经成为趋势和必需。生物纳米材料——纳米几丁质由于其颗粒小、比表面大以及良好的生物相容性,可以作为疫苗的载体从而制备纳米口服疫苗。本研究是利用重组基因技术制备携带几丁质结合域的FMDV抗原蛋白并和纳米几丁质结合制备口服口蹄疫疫苗。本研究通过盐酸水解方法将几丁质粉末与盐酸按照比例为1:300,在85°C条件下反应,产物经过去离子水透析、超声、过滤后的得到长度在150-350nm,宽度在15-50nm带正电荷的纳米几丁质;利用Tempo氧化的方法按照Tempo:NaBr=0.020:0.15,chitin:H2O=1:100,pH=10.5的条件进行反应,产物经过去离子水透析、超声、过滤后,经检测得到长度在100-300nm,宽度在10-40nm之间带负电荷的纳米几丁质。经过检测菌体生长曲线,发现在1:100接种过夜活化菌后,37°C培养3h 15min左右,菌体生长达到对数期,OD₆₀₀值达到0.6-0.8,所以选择在该时间下加入诱导剂IPTG诱导蛋白表达量最高。SDS-PAGE、Western-Blot分析表明,包含几丁质特异性结合域和FMDV抗原基因的重组基因可以在表达载体E.coli BL21（DE3）表达,并且重组蛋白分子质量约为95KDa,并能够被O型口蹄疫单克隆抗体识别,蛋白表达正确,而且IPTG浓度对蛋白质的表达量影响不明显;SDS-PAGE显示,经过超声破碎后,重组蛋白大部分以包涵体形式存在。通过用两种不同pH值的包涵体溶解液对包涵体进行尿素梯度透析复性后,并通过试纸条和Western-Blot检测,发现两种不同pH值的缓冲液复性后的蛋白质能与单克隆抗体识别,具有生物活性。通过将两种pH值的缓冲液中的蛋白分别与相对应的带不同电荷的纳米几丁质进行连接,通过Dot-Blot和BCA试剂盒测定连接后样品上清与沉淀的蛋白质浓度,验证了两种带不同电荷的纳米几丁质均能与相应的不同pH值的重组蛋白连接,但是带正电荷的纳米几丁质与pH为4.3条件的重组蛋白结合效率更高,而且当纳米几丁质与蛋白质比例为2:1时结合效率最高。本研究的意义在于制备了两种带不同电荷的纳米几丁质材料,该材料优点明显,无毒性,属于新型纳米生物材料;构建、表达、复性了能与纳米几丁质结合的重组蛋白;也证明了纳米几丁质可以与所表达的重组蛋白进行结合,并确定带正电荷的纳米几丁质与用酸性缓冲液复性的蛋白质结合效果更佳,为新型纳米疫苗的研制和开发提供了一种新的思路。