【摘 要】
：
桃蚜Myzus persicae（Sulzer）是马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）在自然界中传播效率最高的介体昆虫,本文筛选并鉴定桃蚜口针与PVY编码的HCPro互作的受体蛋白,比较桃蚜取食带毒/无毒三生烟后,桃蚜生物学表型变化,并从转录水平解析差异表达基因与表型变化的联系,明确PVY对桃蚜繁殖力影响及可能的分子机制。主要研究结果如下:1.利用酵母双杂交技术对桃蚜口针c DNA
【基金项目】
：
国家自然科学基金“与马铃薯Y病毒HC-Pro蛋白互作的桃蚜口针受体蛋白的筛选鉴定”（31801708）； 湖南省自然科学基金“PVY诱导桃蚜转录组差异表达分析及差异基因在传毒过程中的功能验证”（2017JJ3155）；
论文部分内容阅读
桃蚜Myzus persicae（Sulzer）是马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）在自然界中传播效率最高的介体昆虫,本文筛选并鉴定桃蚜口针与PVY编码的HCPro互作的受体蛋白,比较桃蚜取食带毒/无毒三生烟后,桃蚜生物学表型变化,并从转录水平解析差异表达基因与表型变化的联系,明确PVY对桃蚜繁殖力影响及可能的分子机制。主要研究结果如下:1.利用酵母双杂交技术对桃蚜口针c DNA文库进行筛选,获得了一批与PVY HC-Pro蛋白可能存在互作关系的蛋白;利用表面等离子共振技术对桃蚜口针蛋白溶液筛选,也获得了一批可能与PVY HC-Pro存在互作关系的蛋白。结合PVY HC-Pro与桃蚜口针互作特点和生物信息学分析结果,最终共选定8个候选蛋白。2.克隆8个候选蛋白全长序列构建成为捕获载体,利用酵母双杂交技术,对候选蛋白和HC-Pro的互作关系进行进一步确认。经过两两互作验证后,共验证得到了3个存在互作关系的蛋白:cuticle protein 3-like、protein obstructor-E和endocuticle structural glycoprotein ABD-4-like。其中互作性最强的为cuticle protein 3-like,即类表皮蛋白3（CP3L）。通过GST Pull-down和烟草叶片内双分子荧光互补实验（Bi FC）验证CP3L与HC-Pro的互作关系,结果均未检测到互作信号。原核表达过程中修饰和折叠不正确可能是造成GST Pull-down阴性结果的原因,而Bi FC中,CP3L表达后与HC-Pro互作的区域定位于细胞外侧,无法与细胞内表达的HC-Pro产生互作关系,因此无荧光信号产生。后续研究将采用CO-IP、抗体封闭等验证方法进一步确认二者的互作关系。3.利用高通量测序技术对取食带毒/无毒三生烟的桃蚜进行转录组学测序。对转录组学数据探讨和分析,发现与桃蚜翅型变化和体色变化相关的基因,如表皮蛋白、飞行肌相关蛋白、能量代谢通路、保幼激素及类胡萝卜素合成通路等有显著差异。而这些差异与桃蚜取食带毒/无毒三生烟后出现生物学变化相一致,说明感染PVY的烟草可能通过调控上述基因的表达影响桃蚜生物学性状的改变。4.鉴定了Gus基因的桃蚜同系基因,命名为Mp Gus。对该基因进行多序列比对和进化树分析发现,该基因中SPRY结构域和SOCS结构域在不同物种中保守性非常高,除了这两个结构域外,还发现一个包含约90个氨基酸序列的区域在不同种类的蚜虫中高度保守。通过RNAi和q PCR技术,分析了Mp Gus对桃蚜胚胎发育和繁殖力的调控作用,发现Mp Gus被干扰后的桃蚜繁殖力降低了55.7%。同时发现,桃蚜取食PVY侵染的烟草也会导致Mp Gus表达量和繁殖力下调。
其他文献
目的本研究旨在观察艾灸对乳腺癌患者化疗性中性粒细胞减少症（CIN）的影响,主要对白细胞（WBC）计数和中性粒细胞绝对值（ANC）的改善作用,是否可以提高化疗依从性,探讨艾灸对不良反应和生存的影响。从中性粒细胞转录组学的角度,筛选艾灸干预中性粒细胞的差异表达基因（DEGs）,以阐释艾灸改善乳腺癌化疗性中性粒细胞减少症（CIN）的效应机制。方法第一部分艾灸改善乳腺癌辅助化疗性中性粒细胞减少症的随机对照
【目的】研究补阳还五汤对冠脉支架患者临床预后的研究和补阳还五汤对冠脉支架内皮化的作用以及对EPCs功能调节的机制探讨。【方法】1.临床研究部分通过对急性冠脉综合症PCI患者的随机对照研究,考察补阳还五汤对冠脉支架术后患者临床预后的研究。观察补阳还五汤在30天内,对急性冠脉综合征支架术后患者中医症候的影响以及心脏不良事件的影响;观察补阳还五汤在30天随访期间,对急性冠脉综合征支架术后患者纽约心功能分
目的:（1）评价加味越鞠丸对痰瘀互结型高血压患者颈动脉硬化、血脂、血清炎性因子、血压及中医证候的影响;（2）通过细胞实验进一步阐明其机制。方法:临床研究:筛选痰瘀互结证高血压患者,选用随机、对照、双盲、单模拟剂、优效性检验的研究方法,对照组给予辛伐他汀片+加味越鞠丸安慰剂,治疗组给予辛伐他汀片+加味越鞠丸颗粒剂,总疗程24周,每2周随访一般情况及不良事件,研究开始、12周及研究结束时检测血常规、肝
目的:在急慢性肝脏疾病过程中,胆管反应（ductularreaction,DR）的种类及其作用究竟是保护肝脏还是促进肝纤维化的进展并不是十分明确。研究报道胆管反应的种类、细胞来源和作用可能取决于肝脏损伤类型或动物模型种类。Hedgehog信号通路在肝纤维化发生发展中发挥着重要作用,但其在肝纤维化病理过程中肝祖细胞（hepatic progenitor cells,HPCs）增殖、分化与DR中的作用
稻瘟病（Rice Blast）是目前严重威胁粮食产量及水稻产业可持续发展的毁灭性病害之一。利用植物内生菌防御作物病害、调控作物生长,是作物病害综合治理的有效措施之一。本研究从湖南桃江病圃的健康水稻样本中分离、鉴定了1株蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）菌株YN917,并检测了该菌株对水稻的促生效果及对水稻稻瘟病的防治效果及作用机理,并对其进行了全基因组测序。主要研究结果如下:通过平板对
第一部分目的:观察白虎加桂枝汤联合小剂量秋水仙碱对湿热痹阻型急性痛风性关节炎（AGA）患者的临床疗效。方法:采用随机、双盲、安慰剂对照研究,将纳入的湿热痹阻型AGA患者102例随机分为治疗组与对照组,进行为期10天的疗效观察,两组均给予小剂量秋水仙碱,对照组加用安慰剂,治疗组加用白虎桂枝汤免煎颗粒剂,研究两组患者治疗前后临床症状、体征以及血清学中炎症指标、TLR4/NF-κB通路中相关因子的变化,
番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus,ToCV）为限制在寄主韧皮部的RNA病毒,依靠媒介昆虫粉虱以半持久的方式进行传播。ToCV于2004年首次在我国台湾发现,自2012年开始,陆续在我国北京、山东、湖南等10多个省（市）蔓延扩散,严重影响番茄等农作物的生产。目前,关于半持久病毒与植物及介体的互作机制研究较少,本研究测定了ToCV侵染对烟粉虱选择偏好的影响、以及对植物营养、挥
目的明确“祛瘀生肌”法临床治疗糖尿病性溃疡瘀证的有效性和安全性,对前列腺素转运蛋白及其相关因子前列腺素E2、血管内皮生长因子的影响。阐明“祛瘀生肌方”主要通过抑制前列腺素转运蛋白表达,从而提高了前列腺素E2、血管内皮生长因子的表达,以促进db/db小鼠创面愈合和人真皮微血管内皮细胞迁移能力。方法第一部分:采用随机、对照研究方法,以糖尿病性溃疡瘀证患者为研究对象,经4周“祛瘀生肌方”治疗后,观察对比
目的:明确升陷汤对慢性心力衰竭伴“大气下陷”患者的临床疗效,并通过动物及细胞实验探索其干预心肌细胞凋亡的可能机制,为中西医结合治疗慢性心力衰竭提供一定依据。方法:临床研究:本研究采用随机对照的研究方法,共纳入78例符合慢性心力衰竭伴“大气下陷”患者。随机分为对照组及治疗组,两组患者在原西药治疗方案的基础上均给予生活方式干预,治疗组加载升陷汤进行干预,治疗2个月。干预前后采集患者一般资料、诊室血压、
第一部分中医药干预非小细胞肺癌根治术后患者生存期的临床研究目的通过回顾性队列研究,比较中医药治疗与术后辅助治疗或临床随访对非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）根治术后患者生存期的影响,对其生存状态及预后相关因素进行分析,明确中医药预防NSCLC根治术后复发转移并延长总生存期的作用。方法收集自2007年12月至2018年7月就诊于同济大学附属上海市肺科住院