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番茄斑萎病毒病是世界上分布范围广、危害较大的一种病害。本研究以番茄斑萎病毒病的抗病纯合材料(Sw-5/Sw-5)、抗病杂合材料(Sw-5/sw-5)和感病纯合材料(sw-5/sw-5)作为实验材料,参考已发表的相关文献,根据Sw-5基因序列,使用软件Primer 5.0设计特异性引物,经PCR扩增获得目的片段,筛选获得了与抗病基因Sw-5紧密连锁的SCAR标记“SW-5-2”,获得的分子标记可以区分抗病纯合和抗病杂合基因型材料,是一种共显性SCAR标记。“SW-5-2”SCAR标记:利用特异性引物SW-5-2F/SW-5-2R对实验材料进行PCR扩增后,基因型为抗病纯合的材料出现574bp的特异片段;基因型为抗病杂合的材料出现464bp和574bp两个特异片段;基因型为感病纯合的材料出现464bp的特异片段。引物序列为SW-5-2 F:5’-AAT TAG GTT CTT GAA GCC CAT CT-3’;SW-5-2R:5’-TTC CGC ATC AGC CAA TAG TGT-3’。以9种不同遗传背景、不同来源的番茄品种为实验材料,对获得的“SW-5-2”标记进行了验证。验证结果表明该分子标记清晰易辨认、稳定性高,是一个可靠的共显性标记。利用获得的分子标记,在苗期对63份未知基因型的育种材料进行辅助选择,筛选出抗病纯合基因型材料6份,抗病杂合基因型材料9份。以“SW-5-2”分子标记为基础,结合Ty-1、I-2的单一抗病基因分子标记,反复对底物浓度、引物比例、退火温度等实验条件进行优化,最终建立了同时检测抗病基因Sw-5、Ty-1的双重PCR技术体系和同时检测抗病基因Sw-5、I-2的双重PCR技术体系。同时检测抗病基因Sw-5、Ty-1的双重PCR技术体系,模板DNA浓度1.5μL,引物SW-5-2和TY-1的添加比是1μL:1μL,退火温度为57℃;同时检测抗病基因Sw-5、I-2的双重PCR技术体系,模板DNA浓度1.5μL,引物SW-5-2和I-2的添加比是0.5μL:1μL,退火温度为53℃。利用获得的双重PCR技术体系对未知基因型的育种材料进行辅助选择,筛选出同时含有Sw-5和Ty-1基因的纯合抗病基因型材料2份,同时含有Sw-5和I-2基因的纯合抗病基因型材料1份。本研究获得的“SW-5-2”的分子标记以及同时检测抗病基因Sw-5、Ty-1和同时检测抗病基因Sw-5、I-2的两种双重PCR技术体系,为抗病种质创新和抗病基因聚合育种提供了坚强的技术支撑。筛选获得的抗病新种质为进一步培育具有复合抗性的番茄新品种奠定了物质基础,对番茄生产的持续稳定发展具有重大意义。