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肝癌对人类健康危害严重,发病率和病死率高,我国是肝癌的高发区,肝癌相关死亡率居全球前列。肝癌早期缺乏典型临床症状,多数患者起病时即为肝癌中晚期,失去了外科手术治疗的机会。而外科手术以外的介入、放疗及生物治疗等疗效不甚理想,且肝癌恶性程度高易复发和转移,中晚期肝癌的治疗仍是世界难题,因此,开发有效药物治疗具有重要意义。人工合成的小分子嘌呤类似物reversine在包括人前列腺癌、甲状腺癌、乳腺癌、非小细胞肺癌及人尿路上皮细胞肿瘤等中均被证实具有抗肿瘤作用,并且reversine被证实是ATP竞争性Aurora激酶抑制剂。通过对文献回顾所知目前reversine对肝癌的研究还未见系统报导,在本研究中,拟探讨了 reversine对人肝癌细胞HepG2生长的影响作用及其相关机制,为寻找新的肝细胞癌治疗靶点提供理论依据。本课题探讨了 reversine对人肝癌细胞HepG2增殖、克隆形成、细胞凋亡和细胞DNA含量的影响。人肝癌细胞HepG2细胞株经不同浓度reversine(0.1μM-1.6μM)处理后,应用MTS法检测其对细胞的增殖能力的影响;采用克隆形成实验评估reversine作用于人肝癌细胞HepG2的远期效应;采用流式细胞技术Annexin-V-FITC/PI双染法检测人肝癌细胞HepG2的凋亡率;采用流式细胞技术PI染色法检测人肝癌细胞HepG2的DNA含量;并采用Western Blot检测凋亡相关蛋白PARP、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和细胞周期相关蛋白cyclinB1和p21表达水平的变化。结果显示,与对照组相比,不同浓度reversine对HepG2细胞的增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系,IC50值为0.94 μM。Reversine可以显著抑制HepG2细胞的克隆形成能力(P<0.05),且经较高浓度reversine(0.2μM-1.6μM)处理后的HepG2细胞几乎不能形成肉眼可见的细胞克隆;其次,reversine可以诱导HepG2细胞多倍体形成(P<0.05),且多倍体细胞百分数随reversine的浓度增加而增加;HepG2细胞经reversine孵育48小时后,细胞周期相关蛋白cyclin B1表达水平上调伴随着p21的表达水平下降,提示reversine处理后HepG2细胞周期M期受阻,细胞在完成S期DNA复制后可能跳过原本未完成的M期而直接进入了下一轮细胞周期过程,从而导致了细胞多倍体的形成;另外,检测细胞凋亡率发现reversine可以诱导HepG2细胞凋亡(P<0.05),且细胞的凋亡率与reversine的浓度呈正相关;再者,凋亡相关蛋白中活化PARP和Bax的表达水平明显上调,而Bcl-2及Bcl-xL蛋白的表达水平下降,提示reversine诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡可能是通过线粒体依赖的内源性凋亡途径完成。总之,reversine可以通过干扰细胞周期诱发细胞多倍体形成并诱导细胞凋亡的方式抑制人肝癌细胞HepG2细胞的生长,并且其诱导凋亡可能与线粒体依赖的内源性凋亡途径有关。