蜂胶黄酮影响卵巢癌SKOV3细胞侵袭与迁移作用的机制研究

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目的:探索蜂胶黄酮治疗卵巢癌的潜在机制,为卵巢癌新药研发提供思路。方法:提取蜂胶黄酮的最主要的14种成分,将这14中单药的2D结构以SDF的格式下载代入Pharmmapper网站获取各单药的预测靶点基因。将“ovarian cancer”作为关键词,从五个数据库(OMIM、Gene Cards、Pharm Gkb、TTD、Drug-Bank)获得目前已知的与卵巢癌相关的疾病靶基因。利用Rstudio软件,取蜂胶黄酮对应靶基因与卵巢癌相关基因的交集靶点基因,导入蛋白互作网络分析平台STRING数据库,建PPI网络。然后再把潜在作用靶点基因输入Cytoscape,并绘制药物-疾病调控可视化网络图。最后,将获取的潜在作用靶点基因用Rstudio软件进行GO功能分析和KEGG通路富集分析,得出相关的靶基因及靶基因相关的信号通路。将网络药理学得出来的结论进行下一步的细胞水平实验验证,选取卵巢癌SKOV3细胞株作为蜂胶黄酮的研究。蜂胶黄酮的浓度设置为0μg/m L、40μg/m L、80μg/m L、100μg/m L四个浓度梯度,通过转染、Transwell、划痕以及Western blot实验来验证蜂胶黄酮对卵巢癌细胞的侵袭迁移的影响。结果:基于网络药理学得出蜂胶黄酮治疗卵巢癌的潜在活性靶基因有173个,其中包括:THBS1、HDAC6、HDAC7、MMP2、ZEB1、CDK2等。用Rstudio软件进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析得出,蜂胶黄酮通过抑制SDC1的表达来抑制PI3K/AKT的磷酸化,从而来抑制卵巢癌的侵袭迁移。通过体外的细胞实验验证,Transwell和划痕实验得出蜂胶黄酮能抑制卵巢癌细胞的侵袭迁移,且伴随着浓度依赖性;THBS1能促进卵巢癌细胞的侵袭迁移。有文献报道SDC1与THBS1共表达,且通过Western blot实验得出,SDC1与THBS1之间的表达变化呈正相关的关系,同时蜂胶黄酮能以浓度依赖性抑制THBS1和SDC1蛋白的表达,并且抑制了p-PI3K和p-AKT蛋白的表达。结论:综上所述,THBS1是蜂胶黄酮治疗卵巢癌的最重要的一个潜在作用靶点基因,蜂胶黄酮可以直接抑制THBS1的表达,间接导致SDC1的表达下降,从而抑制PI3K/AKT信号通路来影响卵巢癌细胞的侵袭迁移。
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