背景与目的:目前国内原代主动脉内皮细胞的分离仅限于鼠,兔,牛等动物,仍没有报道能够分离人主动脉内皮细胞。因此本实验建立体外人主动脉内皮细胞（HAECs）提取和培养的方法,为后期人主动脉内皮细胞的研究打下基础。材料与方法:从术中取下的废弃的人主动脉组织上剥离内皮层,予以Ⅰ型胶原酶消化分离提取HAECs,利用倒置显微镜观察其生长状况,检测其生长能力,免疫组织化学方法及流式细胞术方法鉴定细胞及检测细胞纯度,以ox-LDL检测细胞吞噬功能并检测细胞在体外的血管生成能力。结果:0.1%及0.2%的Ⅰ型胶原酶,最佳的消化时间均为50min左右,2h贴壁细胞数分别2.52*10~4±2.10*10~3,4.05*10~4±3.84*10~3。细胞融合后在倒置显微镜下呈"鹅卵石"样排列生长。CD31+及Ⅷ因子鉴定为阳性,细胞纯度达96.43%±4.12%（n=5）。细胞内吞氧化低密度脂蛋白的能力及血管生成功能良好。结论:钝性分离主动脉内皮层,辅以Ⅰ型胶原酶消化是一种较好的HAECs获取方法,酶浓度及消化时间是其重要的影响因素。目的:自噬功能减退是糖尿病患者内皮功能障碍的主要原因。本研究旨在探讨糖尿病自噬减退与内皮细胞凋亡的关系及其机制。方法与结果:从糖尿病患者术中取下的主动脉组织中分离出主动脉内皮细胞（endothelial cells,ECs）。用含有晚期糖基化终产物（glycation end products,AGEs）的培养基来培养的人主动脉内皮细胞。Western blot法检测自噬和凋亡相关蛋白的表达。利用投射电子显微镜观察细胞内自噬体。细胞免疫荧光法检测自噬体和溶酶体的融合的情况。与非糖尿病患者相比,糖尿病患者LC3-Ⅱ和p62水平明显升高,与此同时ATG14、STX17的表达量,LC3-Ⅱ与LAMP2,ATG14与STX17共同定位表达均下降。长期的AGEs干预会导致LC3-II和p62的表达和自噬体的数量显著上调,同时导致内皮细胞中ATG14、STX17、Rab7水平降低,LC3-Ⅱ与LAMP2共定位及ATG14与STX17共定位的减弱。随着Caspase-3水平的升高和bcl-2表达的下降,凋亡率显著升高。3-甲基腺嘌呤（3-MA,3-methyladenine）抑制自噬可降低AGEs诱导的ECs凋亡。在AGEs刺激生长的ECs内可以检测到较高水平的Fox O1、Ac-FoxO1及Ac-Fox O1与ATG7的结合。利用si Fox O1下调Fox O1的表达,从而降低AGEs诱导的自噬并且促进ATG14的表达和LC3-Ⅱ与LAMP2,ATG14与STX17的共定位。结论:在糖尿病患者的内皮细胞中存在自噬减退和自噬体溶酶体融合受损的状况。Fox O1通过抑制ATG14的表达,通过影响自噬体溶酶体融合从而介导AGEs诱导的内皮细胞自噬性凋亡。