【摘 要】
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近年的研究显示,脱皮马勃中生物碱成分具有广阔的开发前景。本文在脱皮马勃液体发酵的基础上,对脱皮马勃的总生物碱提取和纯化方法进行优化,以期对脱皮马勃的药用价值进一步开发
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近年的研究显示,脱皮马勃中生物碱成分具有广阔的开发前景。本文在脱皮马勃液体发酵的基础上,对脱皮马勃的总生物碱提取和纯化方法进行优化,以期对脱皮马勃的药用价值进一步开发和利用。主要研究内容如下:1、对脱皮马勃液体发酵培养基进行优化,获得最优摇瓶配方为蔗糖3%、黄豆粉1%、蛋白胨0.2%、0.15%磷酸二氢钾、0.05%硫酸镁。按优化后培养基2%接种量培养5d后干燥菌丝体重量可达0.72g/100mL。2、使用7L发酵罐装液量5L对液体发酵条件进行反应器放大,最终菌丝体获得量为6.15g/L,与摇瓶接近。3、对酸性染料比色法测定马勃总生物碱含量的方法进行选择,最终确定最适酸性染料为溴百里酚蓝,测定波长为410nm。此测定方法相对标准偏差为0.9%,平均加样回收率为100.32%,结果稳定可靠。4、结合使用单因素试验、正交设计和响应面法,研究醇回流法提取脱皮马勃总生物碱时提取pH、乙醇浓度、料液比、提取时间和提取次数的影响,建立了一个总生物碱得率与影响因子的多元二次回归方程,并依此确定总生物碱的最佳提取条件。结果表明最佳提取条件为pH2的78%乙醇,料液比1:18,提取时间188min×3。5、选用常用的5种大孔吸附树脂进行静态吸附和静态解吸试验,HPD-100大孔吸附树脂较适合马勃总生物碱的分离纯化。纯化后生物碱纯度从28.36%提高到60.58%,纯化倍数为2.14。
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