目的建立HBV感染者外周血单个核细胞（PBMC）microRNA（miRNA）的xMAP液态芯片的检测方法，并运用此技术研究HBV感染者不同时期miRNA表达变化及意义，用直接测序法检测HBV基因型及P区耐药突变位点与HBV感染不同时期的相关因素，探讨其在乙肝慢性化演变中的作用及其在诊断、治疗、判断预后中的应用价值。方法第一部分建立基于xMAP液态芯片技术定量检测HBV感染不同时期PBMCmiRNA的方法，并用该法检测急性乙型肝炎（AHB，40例）、慢性乙型肝炎(CHB，53例)、乙肝后肝硬化(LC，44例）、原发性肝癌(HCC，32例）及正常健康对照组（NC，40例）标本PBMC中miR-191、-223、-222、-145、-21、-31、-126、-20a、-372的表达变化，分析其在乙肝慢性化演变中的作用。第二部分采用直接测序法检测第一部分配对血清标本HBV基因型及HBV DNA P基因区耐药位点突变，对HBV感染后疾病转归的可能相关因素包括性别、年龄、HBV基因型、HBV DNA载量水平、HBeAg状态、miRNA表达水平作多因素Logistic回归分析，分析其在乙肝慢性化演变中的作用。结果第一部分成功建立了PBMC miRNA的xMAP液态芯片定量检测方法，其具有特异性、重复性、准确性高，能快速、高通量地检测临床标本等优点；与NC组相比，乙肝患者miR-222、-191、-145、-21、-31、-372在HBV感染不同时期无统计学差异（P均>0.05）；miR-223、-126、-20a的表达有统计学差异（P<0.05），通过多重比较分析，miR-126除AHB和NC组（P=1.00）、CHB和LC组（P=0.11）外，其余各组间均有统计学差异（P<0.05），且随HBV感染慢性化演变其miR-126表达下调；MiR-20a除AHB和NC组（P=1.00）及CHB（P=0.08）组外，其余各组间均有统计学差异（P<0.05），且随HBV感染慢性化演变表达上调；miR-223除NC和AHB组（P=1.00）之外，其余各组间比较均有统计学差异（P<0.05），miR-223在AHB组表达最高，随HBV感染慢性化演变表达下调。第二部分本研究结果显示苏州HBV患者基因型为B、C型，未见其他基因型，随着AHB演变为CHB、LC、HCC，不同时期其基因型比例有显著性差异（P<0.05），随着病程进展C基因型所占的比例逐渐增高，并且各组间比较有统计学差异（P<0.05），提示C基因型可能与乙肝慢性化进展有关，且与肝癌的发生发展有关。通过直接测序法检测P基因区耐药相关位点发现，在自然状态下HBV DNA也可发生P基因区耐药位点相关基因突变，LAM相关的耐药基因突变率可达11.25%，ADV相关的耐药基因突变率可达4.73%，LdT与LAM存在交叉耐药位点，这些突变株占HBV感染者的10.65%，提示在NA抗病毒药物使用前就可能存在耐药突变株。通过对性别、年龄、HBV基因型、HBV DNA载量水平、HBeAg状态、miRNA表达水平以及P基因区位点突变情况等进行多因素Logistic回归分析，结果表明HBV C基因型、DNA载量持续低水平、miR-20a表达上调、miR-126和miR-223表达下调可能与乙肝慢性化进展有关，而HBeAg状态、自然状态下发生的耐药相关位点突变，年龄、性别等因素可能与乙肝慢性化演变无关。结论1.基于xMAP液态芯片法定量检测HBV感染者PBMC miRNA具有特异性高、准确度高、重复性好等特点，检测miRNA所需样本量少，无须逆转录及PCR过程，具有高通量，多指标灵活组合检测的优点。2.miR-126、-223、-20a三种miRNA在HBV感染不同时期与NC组相比，表达具有显著性差异，从HBV急性感染到CHB及发展为LC、HCC进程中其miR-126、miR-223表达下调和miR-20a表达上调提示miRNA表达的变化可能与HBV感染性肝病慢性化病变，甚至乙肝性肝癌发病有关。HBV感染不同时期对其PBMC作miR-126、miR-223、miR-20a定量检测对HBV感染慢性化演变和诊疗均具有一定的价值。3.在自然状态下，HBV存在P基因区耐药相关的突变位点，提示在使用NA抗病毒药物前，HBV感染者就可能感染了耐药突变株，在临床经验治疗HBV相关肝病前应常规检测HBV耐药基因突变情况，为临床有效诊断、治疗，减少不必要的耐药发生和减轻经济负担提供依据。4. C基因型、HBV DNA持续低载量以及miR-126、miR-223低表达、miR-20a高表达可能是导致乙肝慢性化的相关因素，尤其可能是肝癌发生的危险因子，常规检测基因型、HBV DNA及miRNA的定量检测可为监测病情、判断预后、及时治疗预防乙肝慢性化进展为LC和HCC提供资料。