研究目的:本研究通过UHPLC-MS/MS技术考察野鸢尾苷（Iridin）及其苷元野鸢尾黄素（Irigenin）在SD大鼠体内的药物代谢动力学性质,并以药代数据为依据开展野鸢尾苷体内代谢产物鉴定研究,以阐明受试药物在体内的代谢物谱,为该药物的安全性评价以及开发前景提供理论依据。研究方法:1.以非那西汀作为内标,开发一种简便、快速、准确的UHPLC-MS/MS方法,用于同时测定SD大鼠血浆中野鸢尾苷及野鸢尾黄素的含量,并进行方法学验证。野鸢尾苷标准品分散于0.5%CMC-Na溶液中,搅拌过夜,获得10 mg/mL的混悬液。SD大鼠经灌胃给予100mg/kg的野鸢尾苷混悬液后,于确定时间点采集血样,离心获取血浆。使用UHPLC-MS/MS方法测定血浆中野鸢尾苷与野鸢尾黄素的浓度,用WinNonlin 7.0软件计算两种物质的药代动力学参数。2.根据上述药动学实验结果,设计代谢产物鉴定实验方案。SD大鼠经灌胃给予100 mg/kg的野鸢尾苷混悬液后,分别放置于代谢笼中,收集给药前任意时间段尿样和粪样以及给药后0-24 h时间段内的所有尿样和粪样。药动学实验中的血浆样品按照AUC-Pooling的原理混合,尿样、粪样分别按照等比例体积、重量混合。混合后样品经提取、浓缩和复溶等操作后,通过UHPLC-MS/MS进样分析,运用Xcalibur软件进行数据获取及数据处理。3.野鸢尾黄素与葡萄糖醛酸转移酶共孵育用于鉴定介导野鸢尾黄素体内转化的主要代谢酶。孵育体系包括8 mM的MgCl2、100μM的野鸢尾黄素、25μg/mL阿拉霉素、1 mg/mL的UGT酶以及2 mM UDPGA。药物与UGT酶在37℃水浴中共孵育1 h,加入等体积冰乙腈终止实验,双样本操作。样品经预处理后,采用UHPLC-MS/MS方法定量测定孵育体系中剩余的野鸢尾黄素。研究结果:1.药代动力学实验结果如下:SD大鼠经灌胃给予100mg/kg的野鸢尾苷后,除给药后1h和2h外,其余时间点原形药物在大鼠血浆的浓度低于定量下限（1 ng/mL）,不能够准确计算其药动学参数,因此本文选择其主要代谢产物野鸢尾黄素进行药动学参数计算。野鸢尾黄素经3.05 ±0.39 h达到血浆最大浓度,最大浓度为22.2 ± 11.8 ng/mL,0～24 h内的血浆暴露量为167±45 ng/mL·h。2.代谢产物鉴定实验结果如下:除野鸢尾苷原形外,在SD大鼠血浆、尿样和粪样中共检测到13种代谢产物。其中,在大鼠血浆中检测并鉴定了 5种代谢产物,分别为野鸢尾黄素、M522-4、M536-1、M536-2和M712;在大鼠尿样中检测并鉴定了 10种代谢产物,分别为野鸢尾黄素、M346、M440、M522-1、M522-2、M522-3、M522-4、M536-1、M536-2 和 M712;在大鼠粪样中,除野鸢尾苷外,检测并鉴定了 6种代谢产物,分别为野鸢尾黄素、M302、M316、M332、M346和M440。其主要代谢途径包括野鸢尾苷的去糖基、去甲基、去甲氧基、硫酸结合和葡萄糖醛酸结合。3.代谢酶表型实验结果如下:野鸢尾黄素和包括 UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A7、1A8、1A9、1A10、2B4、2B7、2B10、2B15 和 2B17 在内的 13 种 UGT 酶共孵育 1h 后,UGT1A7、1A8、1A9 和1A10孵育体系中剩余的野鸢尾黄素量均低于初始浓度的30%,表明野鸢尾黄素在大鼠体内的葡萄糖醛酸结合主要由UGT1A7、1A8、1A9和1A10四种代谢酶介导。结论:1.野鸢尾苷经灌胃给药后,大鼠体内野鸢尾苷原形含量很低,但能检测到苷元野鸢尾黄素,其在大鼠体内以正常速度吸收、分布与消除。2.野鸢尾苷在大鼠体内去糖基生成野鸢尾黄素后,主要发生去甲基、去甲氧基、葡萄糖醛酸结合和硫酸结合,其代谢物谱无明显性别差异。3.野鸢尾苷去糖基生成野鸢尾黄素后,进一步的生物转化主要由UGT1A7、1A8、1A9和1A10四种代谢酶介导。