论文部分内容阅读
复方苦参汤由苦参、青黛、白及、地榆、甘草等中药组成,具有生肌止血、消肿敛疮、清热解毒、凉血止血之功效,为有效临床经验方,近十余年来,华中科技大学同济医学院附属协和医院中医科范恒教授采用复方苦参汤临床治疗溃疡性结肠炎数(UC)百例,疗效显著,深受患者好评。在复方苦参汤临床及药效学研究的基础上,本论文探讨了其药学物质基础,为该临床经验方的疗效提供了科学依据,并为其中药新品种的开发奠定了基础。将复方苦参汤视为整体,采用系统溶剂法,将其提取分离为不同物质部位。以溃疡性结肠炎大鼠模型为研究对象,对石油醚萃取物,氯仿萃取物,乙酸乙酯萃取物,正丁醇萃取物等物质部位进行活性筛选,确定了氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物为有效物质部位群。采用色谱分离方法,对抗UC有效物质部位的化学成分进行了分离纯化,从氯仿萃取物中分离出4个单体成分(化合物1-4),从乙酸乙酯萃取物中分离出1个单体成分(化合物5),从正丁醇萃取物中分离出2个单体成分(化合物6-7);采用波谱分析法对上述分离单体进行化学结构鉴定,分别为苦参碱(Matrine)、氧化苦参碱(Oxymatrine)、靛蓝(Indigo)、靛玉红(Indigo red)、没食子酸(Gallic acid)、甘草苷(Glycyrrhizin)、甘草酸(Glycyrrhizinate)。采用LC-MS现代仪器分析方法对复方苦参汤的主要有效物质部位氯仿萃取物的化学成分进行分析鉴定,鉴定出12种化合物,分别为:二羟基苦参碱、乙酰靛叶碱、甲氧基苦参酮、毛蕊异黄酮、2’-hydroxyl-isoxanthohumol、赝靛叶碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、靛蓝、苦参碱、槐定碱、靛玉红,等。采用现代药理学方法,建立了RAW264.7细胞体外炎症模型,利用该炎症模型筛选从复方苦参汤有效部位中分离出的化合物。结果表明,苦参碱、氧化苦参碱、靛蓝、靛玉红等化合物具有显著抗炎活性(苦参碱、氧化苦参碱浓度25μg/mL时即有显著抗炎活性;靛蓝、靛玉红浓度2.5μg/mL时即有显著抗炎活性),为该复方抗UC的主要有效成分。采用Western blot法,对复方苦参汤的主要有效成分靛玉红进行了抗UC作用机理研究。研究结果表明,靛玉红能促进紧密连接肠道黏膜蛋白(Claudin-1、Occludin、ZO-1、JAM-1)表达。