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近几年来,卵黄蛋白原（VTG）作为检测环境雌激素生物标志物的研究已成为生态毒理学研究的热点。在雌激素诱导下,鱼类雄性个体肝脏VTGmRNA表达敏感性高、受外界干扰小,因此,雄鱼肝脏VTGmRNA可以作为一种新的标志物而应用到环境雌激素的地区检测中去。 本文克隆得到了实验标准模式动物斑马鱼（Danio rerio）和长江中下游地区特有的河川沙塘鳢（Odontobutis potamophila）两种实验动物的卵黄蛋白原（VTG）表达基因片段。并应用这两种分子模型检测了几种典型的环境雌激素对其雌激素效应,包括17—β雌二醇（E2）,4—壬基酚（NP）和双酚A（BPA）。最终建立了新的环境雌激素监测的动物mRNA分子模型。 用Trizol一步法提取到两种鱼肝脏总RNA,测得A260/A280均在1.8—2.0之间。根据基因文库中斑马鱼zvtg1cDNA（全长3644bp）序列,以RNA为模板,用自己设计的引物和Yan Tong设计的引物,实验分别得到了569bp和464bp的斑马鱼卵黄蛋白原特异性cDNA扩增片段。比较几种已知鱼种卵黄蛋白原表达基因序列的保守区域,用自己设计的引物,筛选克隆得河川沙塘鳢部分VTG cDNA片段,长780bp,与鰕虎鱼的cDNA（Japanese common goby sequence, Vg-530）有84%同源性,与斑马鱼（zvtg1）相似性为62.4%。从克隆得河川沙塘鳢cDNA推导出卵黄蛋白原氨基酸序列（260aa）与鰕虎鱼最相近。从雌性斑马鱼和雌性河川沙塘鳢肝脏中分别克隆得长为569bp和388bp的卵黄蛋白原特异性克隆扩增片段。相反,在其他组织器官中,鳃、卵巢、表皮、肌肉、肠和目,未得到任何相应的扩增片段。同样,在雄性鱼体肝脏中也无卵黄蛋白原mRNA的表达。证明实验所得了克隆片段确为卵黄蛋白原表达基因片段。 应用半定量RT-PCR法检测环境雌激素对雄性鱼体卵黄蛋白原mRNA表达的诱导。在雄性斑马鱼14天暴露实验中,测得E2、NP和BPA的最低诱导有效浓度分别为20ng/1,20μg/1和50μg/1,mRNA表达量不同程度地随着暴露浓度的提高而上升。在250ng/1 E2、250 μg/1NP和500μg/1BPA时间效应检测中发现,NP在第2天便产生效应,E2和BPA则在第4天发挥作用,三种化合物诱导VTGmRNA表达都在暴露的最后一天达到最大值,OD比值分别为147.97±0.01、29.57±0.06、113.91±0.10。比较而言,NP能最快地引起VTGmRNA表达,E2诱导的mRNA表达量最大。停止暴露后,E2诱导的mRNA表达下降最快,在4天后完全消失。NP和BPA诱导的VTG mRNA在6天后表达消失。我们进一步用间接竞争ELISA法检测血液中卵黄蛋白原（Vg）,结果显示,血液中Vg含量的提高比肝脏VTGmRNA的表达要迟。250μg/1NP处理组在第4天Vg含量明显提高,而250ng/1E2和500μg/1BPA处理组直到暴露第8天Vg含量才上升。停止暴露后,血液Vg含量都基本保持不变或出现小幅下降。在雄性河