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背景:Rh血型系统是所有血型系统中最复杂的血型系统,包含了 50多种抗原,在胎母免疫和新生儿胎儿溶血病(HDFN)中,是最具临床价值的血型系统。RHD、RHCE基因编码决定了 Rh血型抗原。D--变异体是Rh血型系统中一种非常罕见的Rh基因变异型,其红细胞膜上只有D抗原,而C、c、E、e均不能正常表达。本文对D--变异体综合进行RHD、RHAG、RHCE基因、血清学以及家系分析。目的:研究D--变异体的分子遗传背景,以期能够发现新的Rh血型变异体发生机制,同时初步探索了中国人RHAG血型系统中RHAG高频抗原,以及RhD、RhCE抗原表达的影响因素。方法:1.研究对象实验样本来源于甘肃省血液中心的1个D--个体样本及家系成员(其弟弟,父亲,母亲),所有实验样本均是经过血液中心法定检测项目的合格血液。2.实验方法(1)血清学Rh表型检测:分别用盐水试管法、微柱凝胶卡法和间接抗人球蛋白试验鉴定D--个体样本及家系成员RhD、C、c、E和e抗原。(2)序列特异性PCR法(PCR-SSP)检测RHCE基因:设计4对序列特异性引物,根据体系内扩增产物的有或无来判断RHCE基因型。(3)测序:依据RHD、RHCE基因序列的特异性,分别扩增这3个基因的10个外显子,确认产物条带符合后将扩增产物送公司纯化测序,测序序列与标准基因序列进行比对。(4)RHD合子型分析:采用双管PCR方法扩增融合Rh盒子和RHD基因第一外显子,通过扩增产物的条带一次性判断3种RHD合子型。(5)家系分析:通过RHCE基因测序结果结合RHD合子型分析绘制D--个体的家系谱图。结果:1.血清学测定个例为弱D--表型;2.RHC 基因测定结果为DC-表型;3.RHD、RHAG、基因编码区第1-10外显子测序,结果与标准序列一致。RHAG基因未观察到形成Oldeide和Duclos-Like抗原的碱基变异,亦未见形成高频抗原Duclos的RHAG316C>G突变,所有序列均未见杂合峰;4.RHCE基因编码区第1-10外显子测序,发现该个例第3-5外显子缺失,其它外显子正常,第1-2外显子为RHC基因型,确定个体携带RHCE(e)-D(3-5)-CE(e)等位基因,因此血清学检测为D--表型,而基因检测为DC-表型;5.先证者父母和其弟的RHAG、RHD基因编码区序列与先证者完全一致,父母Rh血清学表型分别为DCCee和DccEE,父亲的PCR-SSP和测序结果一致,母亲PCR-SSP结果DCcEE与测序结果一致,而与血清学结果不符(DccEE),弟弟血清学表型、PCR-SSP和测序结果均与先证者一致。结合RHD合子型分析结果,该家系父母分别为DCe/DC-和DcE/DC-基因型,先证者和兄弟为DC-/DC-。结论:1.RHCE(e)-D(3-5)-CE(e 等位基因形成D--表型并稳定遗传;2.RHAG Duclos高频抗原在中国人群中需要观察更多标本才能认可。3.本研究未发现RHAG和RHD基因编码区变异。